Homing das células hematopoiéticas da medula óssea

Summary

Este artigo descreve um protocolo usado para estudar o homing das células hematopoiéticas para seus nichos na medula óssea.

Abstract

Homing é o fenômeno pelo qual transplantadas células hematopoiéticas são capazes de viajar de e para enxertar ou estabelecer residência na medula óssea. Chemomkines vários e receptores estão envolvidos no homing das células-tronco hematopoiéticas. [1, 2]

Este documento descreve o protocolo clássico homing utilizados em estudos de células-tronco hematopoiéticas. Em geral, isso envolve isolar a população de células cuja homing precisa ser investigada, manchando esta população com um corante de juros e injetar essas células na corrente sanguínea de um animal destinatário. O animal é então destinatário sacrificados em um tempo pré-determinado após a injeção e da medula óssea avaliados para a percentagem ou número absoluto de células que são positivos para a tintura de interesse. Em um dos esquemas mais comuns experimental, a eficiência homing das células hematopoiéticas de dois animais geneticamente distintos (um animal tipo selvagem e fora knock-correspondente) é comparada. Este artigo descreve o protocolo de células hematopoiéticas homing no quadro de como o experimento.

Protocol

Começamos a experiência homing, extraindo células para serem usadas no experimento. Para esta experiência atual que estamos interessados ​​em descobrir se o homing de medula óssea para os nichos nos ossos longos de animais destinatário é diferente para as células extraídas da medula óssea de animais WT, como C57BL/6J (WT) e aqueles que são transgênicos nocautes para o receptor de Lysophosphatidic 1 (LPAR1) (KO). Antes de iniciar o experimento, iremos recolher os materiais que precisamos para este experimento. …

Discussion

Homing é o processo pelo qual células da medula óssea, incluindo as células-tronco, as células progenitoras e células diferenciadas, o seu caminho para a medula óssea depois de ser injetado na corrente sanguínea ou na cavidade da medula óssea de camundongos. Como é óbvio a partir da definição, um cientista pode optar por estudar o homing das células-tronco hematopoiéticas, células progenitoras ou células diferenciadas identificados por imunofenotipagem e isoladas por separação de células. Normalmente…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline		Mediatech, Inc	21-031-CV
Sterile Fetal Bovine Serum		Valley Biomedical, Inc	BS3033
0.5M EDTA (pH 8.0)		Boston BioProducts	BM-150
Tryphan Blue solution		Mediatech, Inc	25-900-CI
ACK Lysing Buffer		Lonza	10-548E
Isopropranolol U.S.P.		Denison Pharmaceuticals, Inc
Vybrant DiD cell-labelling solution		Invitrogen	V22887
Vybrant DiI cell-labelling solution		Invitrogen	V22885