렌즈 Zebrafish의 이식과 눈 돌연변이의 분석에의 응용
Summary
렌즈 개발은 다른 조직과 상호 작용을 포함한다. 여러 zebrafish 아이 돌연변이 비정상적으로 작은 렌즈의 크기가 특징입니다. 여기 우리는이 표현형은 본질적 원인이나 렌즈를 둘러싸고있는 조직과 결함이 상호 작용에 의한 있는지 여부를 확인하기 위해 렌즈 이식 실험을 보여줍니다.
Abstract
렌즈는 광학 컵 [1,2]의 개발에 중요한 역할을합니다. 모델 유기체로 zebrafish를 사용하여 렌즈 개발에 관한 질문은 해결할 수 있습니다. zebrafish 작은 크기, 높은 생산력, 짧은 수명주기, 그리고 관리의 용이성 등 여러 가지 유리한 특성에 의한 유전자 연구에 유용합니다. 렌즈 개발 zebrafish에 급속하게 발생합니다. 72 HPF으로 zebrafish 렌즈 기능 성숙이다 [3]. 풍부한 유전 및 분자 자원 zebrafish 연구를 지원하기 위해 사용할 수 있습니다. 또한, 다른 척추 동물들에게 zebrafish 눈의 유사성은 인간의 결함이 뛰어난 동물 모델 [4-7]과 같이 사용에 대한 기초를 제공합니다. 여러 zebrafish의 돌연변이가 어떤 경우에는 렌즈 조직의 완전한 변성에 이르게 세포 사망의 높은 수준 [8]. 포함한 렌즈 이상 전시
렌즈 이상은 본질적인 원인이나 주변 조직과 결함이 상호 작용에 의한인지 확인하려면, 야생 형 안구에 돌연변이 렌즈의 이식이 수행됩니다. 를 사용하여 화재를 광택 금속 바늘, 돌연변이 또는 야생 형 렌즈는 신중하게 기증 동물의 해부를하고, 호스트로 전송됩니다. 야생 타입과 돌연변이 조직을 구분하기 위해 유전자 변형 라인은 기증자로 사용됩니다. 이 줄은 렌즈를 포함한 모든 조직의 막 – 바운드 GFP를 표현합니다. 이 이식 기술은 zebrafish 렌즈 돌연변이의 연구에 필수적인 도구입니다.
Protocol
Discussion
여러 단계 렌즈 transplantations 중 특별한주의가 필요합니다.
- 바늘을 날카롭게 : 그것은 렌즈 이식을 수행하기 전에 몇 가지 바늘을 준비하는 것이 좋습니다, 그리고 바늘 끝이 가능한 얇은해야합니다. 두꺼운 바늘은 치료 눈에 실패를 초래하기 때문에 넓은 직경이 더 많은 조직을 찢어 것입니다.
- 배아를 정리 : 그들의 측면에 누워되도록 마우스 이식하기 전에 배아를 위치합니다. ?…
Acknowledgements
이 절차는 이식 기술은 빌 제프리의 실험실에 의해 동굴 물고기를 위해 개발된 광범위하게 따릅니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
References
- Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens. Dev Biol. 231, 63-76 (2001).
- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
- Avanesov, A., Malicki, J. Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina. Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).
- Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects. Vision Res. 42, 535-540 (2002).
- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
