Trasplante de lentes en el pez cebra y su aplicación en el análisis de mutantes de ojos
Summary
Lente del desarrollo implica interacciones con otros tejidos. Varios mutantes ojo de pez cebra se caracteriza por un tamaño anormalmente pequeño lente. Aquí se demuestra un experimento de trasplante de lentes para determinar si este fenotipo se debe a causas intrínsecas o interacciones defectuosas con los tejidos que rodean a la lente.
Abstract
La lente tiene un papel importante en el desarrollo de la copa óptica [1,2]. Utilizando el pez cebra como modelo, cuestiones relacionadas con el desarrollo del objetivo se puede abordar. El pez cebra es útil para estudios genéticos, debido a varias características ventajosas, como el tamaño pequeño, alta fecundidad, el ciclo de vida corto, y la facilidad de cuidado. El desarrollo de la lente se produce con rapidez en el pez cebra. Por 72 HPF, la lente de pez cebra es funcionalmente maduro [3]. La abundancia de recursos genéticos y moleculares están disponibles para apoyar la investigación en el pez cebra. Además, la similitud de los ojos de pez cebra a los de otros vertebrados, proporciona la base para su uso como un excelente modelo animal de los defectos humanos [4-7]. Varios mutantes del pez cebra presentan anormalidades del objetivo, incluyendo altos niveles de muerte celular, que en algunos casos conduce a una completa degeneración de los tejidos del cristalino [8].
Para determinar si las anomalías de lentes se deben a causas intrínsecas o defectuosa la interacción con los tejidos circundantes, el trasplante de una lente en un ojo mutante de tipo salvaje se lleva a cabo. El uso del fuego pulido agujas de metal, lentes de mutantes o de tipo salvaje son cuidadosamente disecados de los animales donantes, y se introducen en la máquina. Para distinguir los tejidos de tipo salvaje y mutante, una línea transgénica es utilizada como donante. Esta línea expresa de membrana buenas prácticas agrarias en todos los tejidos, incluyendo la lente. Esta técnica de trasplante es una herramienta esencial en los estudios de los mutantes de la lente de pez cebra.
Protocol
Discussion
Varios pasos requieren una atención especial durante el trasplante de la lente.
- Afiladas agujas: Es mejor preparar varias agujas antes de la realización del objetivo del trasplante, y la punta de la aguja debe ser lo más fina posible. Una aguja más gruesa lágrima más tejido debido a su mayor diámetro, provocando una falla en el ojo para curar.
- La organización de los embriones: Justo antes de que el trasplante debe colocar los embriones manera que se acueste de costado. Cuando el posicionam…
Acknowledgements
Este procedimiento sigue en gran medida la técnica de trasplante desarrolladas para peces de las cavernas por el laboratorio de Bill Jeffrey.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
References
- Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens. Dev Biol. 231, 63-76 (2001).
- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
- Avanesov, A., Malicki, J. Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina. Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).
- Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects. Vision Res. 42, 535-540 (2002).
- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
