وفصل التزاوج من الرباعيات المتلحفة reinhardtii عن التحليل الوراثي
Summary
مطلوبة فصل التزاوج والرباعيات للتحليل الجيني في<em> المتلحفة reinhardtii</em>. هنا علينا أن نظهر للطرق القياسية ، تكون الأعراس الإنبات ، والتزاوج واقحة تشريح الرباعيات. هذا البروتوكول يتكون من سلسلة من السهل المتابعة من الخطوات التي من شأنها أن تجعل النهج الوراثية قابلة للعلماء الذين هم أقل دراية<em> المتلحفة</em>.
Abstract
وحيدة الخلية الطحالب الخضراء<em> المتلحفة reinhardtii</em> (<em> المتلحفة</em>) أصبح الحي الشعبي للبحث في مختلف مجالات بيولوجيا الخلية والوراثة بسبب دورة حياة بسيطة ، وسهولة التلاعب لتحقيق النمو والتحليل الجيني ، والموارد الجينومية ، وtransformability النواة والعضيات على حد سواء. سلالات التزاوج هو ممارسة شائعة عند استخدام النهج الوراثية في<em> Chlamydomonass</em> ، لإنشاء diploids الخضري لتحليل الهيمنة ، أو بعد تشريح الرباعيات للتأكد من الميراث النووي مقابل organellar ، لاختبار ألالة ، لتحليل قشوة ، أو لتوليد السكان لغرض خريطة القائم على الاستنساخ. بالإضافة إلى ذلك ، تستخدم بشكل روتيني الصلبان على الجمع بين المورثات الجينية organellar مع المورثات النووية بوجه خاص. هنا علينا أن نظهر للطرق القياسية ، تكون الأعراس الإنبات ، وفصل التزاوج اقحة الرباعيات. هذا البروتوكول يتكون من سلسلة من السهل المتابعة من الخطوات التي من شأنها أن تجعل النهج الوراثية قابلة للعلماء الذين هم أقل دراية<em> المتلحفة</em>. وأوضح المعلمات الرئيسية وبؤر التوتر. أخيرا ، يتم توفير الموارد اللازمة لمزيد من المعلومات والطرق البديلة.
Protocol
Discussion
التحليل الجيني هو بسيط في المتلحفة ، ولكنه يتطلب تقنيات خاصة لتوليد الأمشاج ومنفصلة ذرية الرباعيات. مع سلالات صحية ، ويتم الحصول بسهولة على التقنيات. مع بعض سلالات متحولة ، يصبح أكثر من فن ، والقراء الرجوع المجلد 1 من المرجع المتلحفة نشرت مؤخرا عن المذكرات ا…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويستند هذا البروتوكول على تقنيات علم في مختبر فرانسيس أندريه ولمان في فرنسا المعهد البيولوجيا الفيزيائية Chimique ، باريس. الكتاب مدينون بالعرفان لBascou جيرارد جاكلين ، الذي قدم أصلا DBS إلى التقنيات الجينية المتلحفة. معتمد المتلحفة البحوث في المختبر والمؤلفين من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم جائزة MCB – 0646350.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
References
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
