Accoppiamento e di separazione Tetrade Chlamydomonas reinhardtii Per l'analisi genetica
Summary
L'accoppiamento e separazione tetrade sono necessari per l'analisi genetica in<em> Chlamydomonas reinhardtii</em>. Qui mostriamo metodi standard per gametogenesi, l'accoppiamento, la germinazione zigote e dissezione tetrade. Questo protocollo consiste in un facile da seguire serie di passi che renderanno approcci genetici suscettibili di scienziati che hanno meno familiarità con<em> Chlamydomonas</em>.
Abstract
L'alga verde unicellulare<em> Chlamydomonas reinhardtii</em> (<em> Chlamydomonas</em>) È diventato un organismo popolare per la ricerca in diverse aree della biologia cellulare e della genetica a causa del suo ciclo di vita semplice, la facilità di crescita e di manipolazione per l'analisi genetica, risorse genomiche e trasformabilità del nucleo e due organelli. Ceppi di accoppiamento è una pratica comune quando approcci genetici sono usati in<em> Chlamydomonass</em>, Per creare diploidi vegetativo per l'analisi di posizione dominante, o in seguito a dissezione tetrade di accertare l'eredità nucleare vs organelli, per testare allelism, per analizzare epistasy, o per generare popolazioni allo scopo di carta a base di clonazione. Inoltre, incroci genetici sono abitualmente utilizzati per combinare genotipi organelli con particolari genotipi nucleari. Qui mostriamo metodi standard per gametogenesi, l'accoppiamento, la germinazione dello zigote e separazione tetrade. Questo protocollo consiste in un facile da seguire serie di passi che renderanno approcci genetici suscettibili di scienziati che hanno meno familiarità con<em> Chlamydomonas</em>. Parametri chiave e punti problematici sono spiegato. Infine, le risorse per ulteriori informazioni e metodi alternativi sono forniti.
Protocol
Discussion
L'analisi genetica è semplice in Chlamydomonas, ma richiede particolari tecniche per generare gameti e progenie tetrade separati. Con ceppi sani, le tecniche sono facilmente acquisite. Con alcuni ceppi mutanti, diventa più un'arte, e si rimanda Volume 1 del Sourcebook, recentemente pubblicato Chlamydomonas per le note storiche e consigli pratici. Inoltre, va notato che ci sono molte variazioni sul tema di base sopra descritte, che vanno dal metodo per indurre gametogenesi, per il mod…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo protocollo si basa su tecniche apprese nel laboratorio di Francesco-André Wollman presso l'Institut de Biologie fisico-Chimique, Parigi, Francia. Gli autori hanno un debito di gratitudine a Jacqueline Girard-Bascou, che ha originariamente introdotto DBS alle tecniche di Chlamydomonas genetica. Chlamydomonas di ricerca in laboratorio degli autori 'è supportato da premio della National Science Foundation MCB-0646350.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
References
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
