Analyse de l'expression génique dans l'agrile du frêne ( Agrilus planipennis) En utilisant quantitative en temps réel-PCR
Summary
Quantitative PCR en temps réel (qRT-PCR) est un outil efficace pour diagnostiquer les niveaux d'ARNm dans les tissus des insectes et des stades de développement. Dans ce rapport, nous montrons l'utilisation de qRT-PCR pour déterminer les niveaux d'ARNm dans différents tissus des larves et les stades de développement de l'espèce d'insecte invasif, l'agrile du frêne.
Abstract
L'agrile du frêne (AF,<em> Agrilus planipennis</em>) Est un ravageur exotique envahissante, qui a tué des millions de frênes (<em> Fraxinus</em> Spp) en Amérique du Nord.<strong></strong> L'agrile du frêne continue à se propager rapidement et les attaques des cendres des arbres d'âges différents, de jeunes arbres à des arbres matures. Toutefois, à ce jour très peu ou pas de connaissances moléculaires existe pour l'agrile du frêne. Nous sommes intéressés à déchiffrer les mécanismes moléculaires à base physiologique au niveau des tissus que l'agrile du frêne aide à la colonisation réussie de frênes. Dans ce rapport, nous montrons l'utilisation efficace de méthodes quantitatives en temps réel de PCR (qRT-PCR) pour déterminer les niveaux d'ARNm dans différents tissus larvaires (y compris l'intestin moyen, gras corps et cuticule) et les différents stades de développement (dont 1<sup> Er</sup> -, 2<sup> Nd</sup> -, 3<sup> Rd</sup> -, 4<sup> E</sup>-Stades, prénymphes et adultes) de l'agrile du frêne. À titre d'exemple, un gène peritrophin (ci-après nommée,<em> AP-PERI1</em>) Est illustré comme le gène d'intérêt et une protéine ribosomique (<em> AP-RP1</em>) Que le contrôle interne. Peritrophins sont des composantes importantes de la membrane péritrophique / matrice (PM), qui est la doublure de l'intestin de l'insecte. Le PM a différentes fonctions, dont la digestion et la protection mécanique de la épithélium de l'intestin.
Protocol
Discussion
Les cycles de seuil (Ct) valeur est obtenue pour chaque échantillon dans la plaque qRT-PCR. Pour faire la courbe standard, la valeur de Ct obtenues pour chaque dilution a été comploté contre le journal de sa concentration. Les valeurs de Ct pour les échantillons expérimentaux ont ensuite été reportées sur cette courbe standard de dilution en série. Quantités cibles ont été calculés à partir de différentes courbes standard généré pour chaque tissu soit expérimentation et d'expression du développe…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous reconnaissons l'aide fournie par Lourdes Delta Antequera Arrueta (département d'entomologie, Université Ohio State / OARDC, Wooster, OH) dans la configuration de l'expérimentation. Nous remercions le Dr Thérèse Pologne (USDA, Forest Services, ORA) pour envoyer des échantillons EAB larvaire. Aide fournie par le Dr Luis Un Canas et Nuris M Acosta avec la configuration de microscope est apprécié. Le financement de ce projet a été assuré par des fonds d'État et fédéraux affectés au Centre de l'Ohio Agricultural Research and Development, The Ohio State University.
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