Vorbereitung der Rattenschwanzsehnen für Biomechanik und Mechanobiological Studies
Summary
Dieser Artikel beschreibt die experimentellen Verfahren zur Rattenschwanzsehnen für biomechanische und mechanobiological Studien vorzubereiten. Einige Funktionen der wichtigsten Schritte in Vorbereitung sind nachgewiesen, beginnend mit der Extraktion Querschnittsfläche Messung, Spülen und Laden in den Bioreaktor Kammer.
Abstract
Rattenschwanzsehnen (RTT) sind ein gemeinsames biologisches Modell in experimentellen in vitro-Studien eingesetzt in den Bereichen Sehne Physiologie und Tendopathie. Arbeiten mit diesen Geweben ist eine Herausforderung, weil sie sehr empfindlich sind, und bis jetzt gab es keine streng detailliertes Protokoll für die Isolation.
Angesichts dieser Herausforderungen haben wir Methoden und Instrumente entwickelt, um Manipulationen von RTT und Kontrolle Gewebeviabilität, Sterilität und Unversehrtheit zu erleichtern. Dieser Artikel beschreibt die experimentellen Verfahren zur RTT für biomechanische und mechanobiological Studien vorzubereiten. Extraktion, Querschnittsfläche Messung, Spülen und Laden in den Bioreaktor Kammer: Unsere Arbeit ist in vier Hauptbereiche unterteilt.
Bei jedem Schritt werden alle Verfahren, Materialien und Manipulationen im Detail vorgestellt, so dass sie leicht reproduziert werden kann. Darüber hinaus sind die spezifischen Instrumente entwickelt vorgestellt: eine Manipulation Platte verwendet werden, um RTT zu trennen, eine optische Mikrometer, um das Gewebe während der Querschnittsfläche Messung und eine Verankerung der Lage, die RTT auf einen Bioreaktor befestigen.
Schließlich beschreiben wir die Ergebnisse nach mehreren Tests erhalten unsere Methoden zu validieren. Die Lebensfähigkeit, Sterilität und Unversehrtheit Auswertungen zeigen, dass unser Verfahren streng genug für Manipulationen fragile Gewebe wie Rattenschwanzsehnen sind.
Protocol
Discussion
Durch die Anwendung dieser experimentellen Verfahren, können wir eine Vielzahl von in vitro Studien durchführen zu dieser Art von Geweben. Da war zum Beispiel eine Studie über Gewebedegeneration durch die Anwendung der unter-Stimulation RTT für einen Zeitraum von zehn Tagen zu erfolgen. Jeder Tag, wir Gewebe mechanische Eigenschaften in nicht-destruktive Spannungsrelaxation Tests ausgewertet. Am Ende konnten wir RTT Spannungsverlauf zu beobachten und damit zu analysieren den Verlauf der mechanischen Eigensc…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dieser Artikel wurde von NSERC Grant # 299280, IRSST als ein Stipendium an G. Eltern und FRSQ als ein Bachelor-Student Research Award an M. Cyr unterstützt. Wir bedanken uns bei Yoan Lemieux-Laneville für die Durchführung der Manipulationen auf Video aufgezeichnet.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | Reagent | Wisent inc. | 311-410-CL | Saline solution |
| Glucose | Reagent | Wisent inc. | 609-037-EL | Saline solution
1g/L |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Saline solution
1% |
| DMEM | Reagent | Invitrogen Corp. | 12800-017 | Culture solution |
| Sodium Bicarbonate | Reagent | Wisent inc. | 600-105-CG | Culture solution 3.7g/L |
| FBS | Reagent | Wisent inc. | 090150 | Culture solution 10% |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Culture solution 1% |
| Optic Micrometer | Tool | Custom-made | ||
| Manipulation plate | Tool | Custom-made | ||
| Bioreactor chamber | Tool | Custom-made |
References
- Bennett, M. B., Ker, R., Dimery, N., Alexander, R. Mechanical properties of various mammalian tendons. J. Zool. Lond. A209, 537-548 (1986).
- Dupuis, D. . Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mécaniques et histologiques [dissertation]. , 114-114 (1981).
- Haut, R. C. Age-dependent influence of strain rate on the tensile failure of rat tail tendon. Journal of Biomechanical Engineering. 105, 296-299 (1983).
- Huppé, N., Lessard, J. -. L., Langelier, E. A Bioreactor Design for the Mechanobiological Study of Soft Tissue Damage and Repair in Conditions that Provide the Best Approximation of Actual Use. , (1985).
- Langelier, E., Dupuis, D., Guillot, M., Goulet, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Rancourt, D. Cross-sectional profiles and volume reconstructions of soft tissues using laser beam measurements. J Biomech Eng. 126, 796-802 (2004).
- Lee, T. Q., Woo, S. L. -. Y. A new method for determining cross-sectional shape and area of soft tissues. J Biomech Eng. 110, 110-114 (1988).
- Parent, G., Cyr, M., Cousineau-Pelletier, P., Desbiens-Blais, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Langelier, E. Current Techniques for the Evaluation of Cross-Sectional Area in Rat Tail Tendons Generate Significant Errors. , (1985).
