Induzione e punteggio clinico dell'epatite cronica-recidivante encefalomielite autoimmune sperimentale

Summary

Questo video dimostra il punteggio di induzione e clinica di un modello animale di sclerosi multipla: cronico-recidivante encefalomielite autoimmune sperimentale nei ratti DA. La malattia, indotta da immunizzando topi con una emulsione che contiene tutto midollo spinale di ratto e adiuvante completo di Freund, presenta segni clinici simile alla malattia umana.

Abstract

La sclerosi multipla (SM) è una malattia infiammatoria cronica del sistema nervoso centrale (SNC) che colpisce generalmente i giovani adulti. E 'caratterizzato da demielinizzazione e spaventando gliali nelle aree disseminate nel cervello e nel midollo spinale. Queste lesioni alterano la conduzione nervosa e indurre i deficit neurologici invalidanti che variano con la posizione delle placche demielinizzati nel sistema nervoso centrale (es. paraparesi, paralisi, cecità, incontinenza).

Encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è un modello per la SM. EAE è stato indotto accidentalmente negli esseri umani durante la vaccinazione contro la rabbia, con virus coltivati ​​su coniglio midollo spinale. Residui di iniezione spinale con il virus inattivato indotta la malattia SNC. A seguito di queste osservazioni, un primo modello di EAE è stata descritta nel primati non umani immunizzati con un sistema nervoso centrale omogenato da fiumi e Schwenther nel 1935. EAE da allora è stato generato in una varietà di specie e possono seguire corsi diversi a seconda della specie / ceppo e immunizzante antigene utilizzato. Per esempio, immunizzando topi Lewis con proteina basica della mielina in emulsione con adiuvante induce un modello di EAE acuta, mentre lo stesso antigene induce una malattia cronica nelle cavie.

Il modello di EAE qui descritto è indotta da immunizzando topi DA contro il midollo spinale nel ratto DA emulsione in adiuvante completo di Freund. Ratti sviluppare una paralisi flaccida ascendente entro 7-14 giorni post-vaccinazione. Segni clinici seguono una sclerosi multipla recidivante-remittente per diverse settimane. Patologia grandi spettacoli infiltrati immunitario del sistema nervoso centrale e placche demielinizzazione. Considerazioni speciali per prendersi cura di animali con EAE sono descritte alla fine del video.

Protocol

Induzione e monitoraggio delle patologie cronico-recidivante EAE L'emulsione è una miscela 1:1 di antigene in soluzione acquosa aggiunto integrato adiuvante completo di Freund. E 'molto importante aggiungere l'antigene per l'adiuvante e non viceversa! Ci sono un sacco di rifiuti quando si effettua l'iniezione e una emulsione. Sempre preparare 1,5 o 2 volte più di quello che vi serve. Usa …

Discussion

Ci sono alcune considerazioni importanti per questo protocollo.

La genetica dei topi DA varierà leggermente a seconda di quale allevatore sono acquistato. Queste differenze possono aumentare o diminuire la suscettibilità dei topi EAE a induzione. Se il vostro ratti sono più suscettibili alle EAE si vuole ridurre la forza della vaccinazione utilizzando non integrato completo di Freund adiuvante o adiuvante incompleto di Freund. È anche possibile ridurre la quantità di emulsione iniettati o diluire l'omogeneizzato midollo spi…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s Adjuvant	Reagent	Fisher	DF 311-360-5	Manufactured by Difco
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Reagent	Fisher	DF3114-33-8	Manufactured by Difco
DA rat	Animal	Harlan Sprague Dawley		Females, 7-9 weeks old.
Glass syringes – 5 ml	Tool	Fisher	14-823-10 B
Metal bridge – 18G	Tool	Fisher	14-825-17L
Luer Lok plastic syringes – 3 ml	Tool	Becton Dickinson	309585
Needles – 20G 1 1/2	Tool	Fisher	14-826-5C