Indução e pontuação clínica de doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental

Summary

Este vídeo demonstra o placar de indução e clínicos de um modelo animal de esclerose múltipla: doenças crônico-recidivante encefalomielite autoimune experimental em ratos DA. A doença, induzida pela imunização ratos com uma emulsão contendo medula espinhal de ratos inteiros e adjuvante de Freund completo, apresenta sinais clínicos semelhantes à doença humana.

Abstract

Esclerose múltipla (EM) é uma doença inflamatória crônica do sistema nervoso central (SNC), que comumente afeta adultos jovens. É caracterizada por desmielinização e assustando glial em áreas disseminadas no cérebro e medula espinhal. Essas lesões alterar a condução nervosa e induzir a déficits neurológicos incapacitantes que variam com a localização das placas de desmielinização no SNC (por exemplo, paraparesia, paralisia, cegueira, incontinência).

Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo para MS. EAE foi induzida acidentalmente em humanos durante a vacinação contra a raiva, usando vírus cultivados em coelho medula espinhal. Resíduos de injeção espinhal com o vírus inativado induziram a doença do SNC. Seguindo essas observações, o primeiro modelo da EAE foi descrita em primatas não-humanos imunizados com um CNS homogeneizado por Rivers e Schwenther em 1935. EAE desde então tem sido gerada em uma variedade de espécies e pode seguir cursos diferentes, dependendo da espécie / estirpe e imunizando antígeno utilizado. Por exemplo, imunizando ratos Lewis com proteína básica da mielina em emulsão com adjuvante induz um modelo aguda da EAE, enquanto o mesmo antígeno induz a uma doença crônica em cobaias.

O modelo de EAE aqui descrito é induzida através da imunização contra ratos DA DA medula espinhal de ratos em emulsão em adjuvante de Freund completo. Ratos desenvolvem uma paralisia flácida ascendente dentro de 7-14 dias pós-imunização. Sinais clínicos seguir um curso remitente-recorrente durante várias semanas. Patologia mostra grandes infiltrados imunológico no SNC e placas de desmielinização. Considerações especiais para cuidar de animais com EAE são descritos no final do vídeo.

Protocol

Indução e monitorização de EAE crónica recidivante A emulsão é uma mistura 1:1 do antígeno em solução aquosa adicionado ao complementada adjuvante de Freund completo. É muito importante adicionar o antígeno ao adjuvante e não o contrário! Há uma grande quantidade de resíduos ao fazer e injetando uma emulsão. Sempre preparar 1,5 ou 2 vezes mais do que o que você precisa. Use argamassa autoclav…

Discussion

Há algumas considerações importantes para este protocolo.

Genética de ratos DA diferem ligeiramente dependendo do criador, elas são compradas a partir de. Estas diferenças podem aumentar ou diminuir a susceptibilidade dos ratos à EAE de indução. Se o seu ratos são mais suscetíveis a EAE você vai querer reduzir a força da imunização usando não suplementadas adjuvante de Freund completo ou mesmo incompleta adjuvante de Freund. Você também pode considerar a redução da quantidade de emulsão injetada ou diluir o homo…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s Adjuvant	Reagent	Fisher	DF 311-360-5	Manufactured by Difco
Mycobacterium tuberculosis H37Ra	Reagent	Fisher	DF3114-33-8	Manufactured by Difco
DA rat	Animal	Harlan Sprague Dawley		Females, 7-9 weeks old.
Glass syringes – 5 ml	Tool	Fisher	14-823-10 B
Metal bridge – 18G	Tool	Fisher	14-825-17L
Luer Lok plastic syringes – 3 ml	Tool	Becton Dickinson	309585
Needles – 20G 1 1/2	Tool	Fisher	14-826-5C