توضح هذه المقالة ثقافة شرائح الأنسجة المريضة للدراسات توصيل الجينات وتحليل لاحقة في التعبير الجيني باستخدام التصوير IVIS تلألؤ بيولوجي.
Abstract
هذا الفيديو يصف استخدام أنسجة المريض كنموذج فيفو السابقين لدراسة توصيل الجينات. هو شرائح طازجة الأنسجة المريضة حصلت في وقت الجراحة ، والاحتفاظ بها في الثقافة. نموذج الجسم الحي السابقين نظام يسمح للالتسليم المادي للجينات في أنسجة المريض سليمة ويتم تحليل التعبير الجيني عن طريق التصوير تلألؤ بيولوجي باستخدام نظام الكشف IVIS. نظام الكشف bioluminescent يوضح الكمي سريعة ودقيقة في التعبير الجيني داخل شرائح فردية من دون الحاجة للتضحية الأنسجة. ويمكن استخدام هذا النظام شريحة زراعة الأنسجة في مجموعة متنوعة من أنواع الأنسجة بما في ذلك الأنسجة الطبيعية والخبيثة ، ويسمح لنا لدراسة الآثار المترتبة على الطبيعة غير المتجانسة للأنسجة سليمة وعلى درجة عالية من التباين بين المرضى الفردية. ويمكن استخدام هذا النظام النموذجي في بعض الحالات كبديل للنماذج حيوانية واسطة قبل السريرية والتكميلية قبل دخول التجارب السريرية.
Protocol
إعداد وسائل الإعلام والكواشف المضادات الحيوية الحل الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) مع 200 U / البنسلين مل و 200 ميكروغرام / مل الستربتوميسين ، 5 ميكروغرام / مل fungizone جمع ومعالجة المتو…
Discussion
وصفنا مريض فيفو السابقين نسيج الثقافة والأسلوب bioluminescent نظام كشف لتقييم إيصال الجين غير ثابت داخل الأنسجة البشرية. الأسلوب يوفر وسيلة بسيطة وقابلة للتكرار من شرائح الأنسجة زراعة. انها لديها امكانات كبيرة لأنها تتيح دراسة توصيل الجينات إلى الخلايا البشرية السلي…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد تم تمويل هذا العمل من خلال صندوق كورك جنوب مستشفى جامعة فيكتوريا في مستشفى الثدي ، وجمعية السرطان الأيرلندية (CRI07TAN) ومركز أبحاث السرطان كورك. وكان النسخ المتماثل غير كفء المؤتلف اتش 5 الجسيمات تحت سيطرة الترانسكربتي من المروج CMV هدية عينية من البروفسور أندرو بيكر ، من جامعة غلاسكو.
Rajendran, S., Salwa, S., Gao, X., Tabirca, S., O’Hanlon, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery. J. Vis. Exp. (46), e2378, doi:10.3791/2378 (2010).