Summary

遺伝子デリバリーの患者の組織及び審査のex vivoでの文化

Published: December 20, 2010
doi:

Summary

この記事では、遺伝子デリバリー研究やIVISの生物発光イメージング法を用いて遺伝子発現のその後の分析のための患者の組織切片の文化を説明します。

Abstract

このビデオでは、遺伝子デリバリーの研究のためのex vivoでのモデルのような患者組織の使用について説明します。手術時に得られた新鮮な患者の組織を培養にスライスされ、維持されます。 ex vivoのモデルシステムは、そのまま患者の組織や遺伝子発現に遺伝子の物理的な配信を可能にIVIS検出システムを用いて生物発光イメージングにより解析される。生物発光検出システムは、組織の犠牲を必要とせず、個々のスライス内の遺伝子発現の迅速かつ正確な定量化を示しています。このスライスの組織培養系は、正常および悪性組織を含む組織のさまざまなタイプが使用され、私たちは無傷の組織の均質性と個々の患者間の変化度の高い効果を研究することができますすることができます。このモデルシステムは、動物モデルに代わるものとして、臨床試験に入る前に補完的な臨床モードなど、特定の状況で使用することができる。

Protocol

メディアと試薬の調製 抗生物質溶液 リン酸塩は、200 U / mlペニシリン、200μg/ mlのストレプトマイシン、5μg/ mlのfungizoneで緩衝食塩水(PBS) コレクションと治療培地 200 U / mlペニシリンとダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、200μg/ mlのストレプトマイシン、5μg/ mlのfungizone 培地 10%熱不活性化ウシ胎児血清を含むコレ…

Discussion

我々は、 生体外での患者の組織培養法と非固定のヒト組織内遺伝子送達の評価のための生物発光検出システムを説明します。方法は、培養組織スライスのシンプルかつ再現可能な方法を提供しています。それは、悪性組織を含めてヒト組織の様々に無傷のヒト組織への遺伝子デリバリーの研究、遺伝子送達の解析を可能にし、敬意を持つ個々の患者の間で変動度の高い効果に関する重…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この作品は、コーク南診療所ビクトリア大学病院乳ファンド、アイルランド癌協会(CRI07TAN)とコークがん研究センターで賄われていた。 CMVプロモーターの転写制御下で複製無能な組換えアデノウイルス5粒子が教授アンドリューベイカー、グラスゴー大学から親切な贈り物だった。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM   Sigma-Aldrich D6429  
PBS   Sigma-Aldrich D8537  
Firefly Luciferin   Biosynth, Switzerland    
Dermabond   Johnson & Johnson    
Vibrotome   Leica microsystems VT 1000 A  

References

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Cite This Article
Rajendran, S., Salwa, S., Gao, X., Tabirca, S., O’Hanlon, D., O’Sullivan, G. C., Tangney, M. Ex Vivo Culture of Patient Tissue & Examination of Gene Delivery. J. Vis. Exp. (46), e2378, doi:10.3791/2378 (2010).

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