Summary

ポリオウイルスの同定のための粒子凝集法

Published: April 20, 2011
doi:

Summary

ウイルスの受容体分子を利用して、最近開発された新たな粒子の凝集反応(PA)アッセイは、ポリオウイルス(PV)の迅速かつ容易に識別することができました。この記事では、PVの識別のためのPAのアッセイのための手順が表示されます。

Abstract

世界ポリオ撲滅イニシアティブでは、実験室診断は、急性弛緩性麻痺(AFP)症例の便検体からPVを分離し、識別することによって、重要な役割を果たしている。世界保健機関(WHO)に、世界ポリオ研究所ネットワーク、PV分離と同定は、現在、それぞれ細胞培養系およびリアルタイムRT – PCRを使用して実行されている。 PVのポスト撲滅の時代には、簡単かつ迅速な識別手順は、国立研究所でポリオ症例の迅速な確認のために有用であろう。本研究では、我々は、PVの識別のために開発した斬新なPAアッセイの手順が表示されます。このPAのアッセイは、PV受容体(PVR)分子とPVのすべての血清型に特異的かつ均一な親和性であるビリオンの相互作用を利用しています。手順は簡単です(反応プレート内の1つのステップの手順)と急速に(結果は反応の2時間以内に得ることができます)、および結果が視覚的に(ゼラチン粒子凝集反応の観察)観察される。

Protocol

1。維持培地(MM)と増殖培地(GM)の調製 MMとGMの調製のために、1のポリオ実験室のマニュアルを参照してください。ウシ胎児血清(FCS)および10%FCS 2%添加したダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)はそれぞれ、MMとGMの代替として使用することができる。 2。抗PVの抗体の調製抗PVの抗体(タイプ1、2、または3)の各バイアルに水(バ…

Discussion

このPAアッセイのユニークな点はPV 2の検出のための抗PVの抗体の代わりに、PVRの分子の使用率です。これはPV 3-6のすべての3つの血清型に均一な親和性でPV感作ゼラチン粒子の特異的相互作用が可能になります。 PVRの単量体の形態は、ビリオン上の単一の結合部位(〜-8 M、10 -7の解離定数)7、にのみ中等度の親和性を有するので、私たちは、ゼラチン粒子の感?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

私たちは、彼女の優秀な技術支援のための純子和田に感謝しています。私たちは親切PVR – IgG2aのためのバキュロウイルス発現ベクターを提供するための教授昭夫野本に感謝しています。この研究は、補助金ポリオ撲滅の推進と、厚生労働省からの新興再興感染症に関する研究によって部分的にサポートされていました。

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Sensitized-gelatin particles Fujirebio Inc.   Test kit
Reconstitution buffer Fujirebio Inc.   Test kit
Microtitration plate Fujirebio Inc.   Test kit
Anti-PV antibody RIVM    

References

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Cite This Article
Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Particle Agglutination Method for Poliovirus Identification. J. Vis. Exp. (50), e2824, doi:10.3791/2824 (2011).

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