Summary

Частица Агглютинация Метод Полиовирус Идентификация

Published: April 20, 2011
doi:

Summary

Недавно был разработан новый частиц агглютинации (РА) анализ использования молекулы рецептора вируса позволило быстро и легко идентификации полиовируса (PV). В этой статье мы покажем, процедура анализа ПА для идентификации PV.

Abstract

In the Global Polio Eradication Initiative, laboratory diagnosis plays a critical role by isolating and identifying PV from the stool samples of acute flaccid paralysis (AFP) cases. In the World Health Organization (WHO) Global Polio Laboratory Network, PV isolation and identification are currently being performed by using cell culture system and real-time RT-PCR, respectively. In the post-eradication era of PV, simple and rapid identification procedures would be helpful for rapid confirmation of polio cases at the national laboratories. In the present study, we will show the procedure of novel PA assay developed for PV identification. This PA assay utilizes interaction of PV receptor (PVR) molecule and virion that is specific and uniform affinity to all the serotypes of PV. The procedure is simple (one step procedure in reaction plates) and rapid (results can be obtained within 2 h of reaction), and the result is visually observed (observation of agglutination of gelatin particles).

Protocol

1. Подготовка обслуживания среды (ММ) и ростовой среды (ГМ) Для приготовления ММ и ГМ см. полиомиелита руководства лабораторией ВОЗ 1. Среда Дульбекко изменение Орла (DMEM) с добавлением 2% эмбриональной телячьей сыворотки (FCS) и 10% FCS может быть использован в качестве заме?…

Discussion

Единственной точкой этого анализа ПА использования PVR молекулы, а не анти-PV антитела для выявления PV 2. Это позволяет специфическим взаимодействием сенсибилизированных желатин частиц с PV с равномерной близости ко всем трем серотипов П. В. 3-6. Мы использовали форму immunoadhesin из PVR (PVR-IgG…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Мы благодарны Junko Вада за отличную техническую помощь. Мы благодарны профессору Акио Номото за любезно предоставленные вектор бакуловирус выражение для PVR-IgG2a. Это исследование было частично поддержана грантами-в-помощь для содействия ликвидации полиомиелита и исследованиям в области новых и вновь возникающих инфекционных заболеваний из Министерства здравоохранения, труда и социального обеспечения.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments
Sensitized-gelatin particles Fujirebio Inc.   Test kit
Reconstitution buffer Fujirebio Inc.   Test kit
Microtitration plate Fujirebio Inc.   Test kit
Anti-PV antibody RIVM    

References

  1. World Health Organization. . Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , (2004).
  2. Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).
  3. Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. Interaction of poliovirus with its cell surface binding site. Virology. 201, 107-115 (1994).
  4. Koike, S. The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms. Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).
  5. Mendelsohn, C. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).
  6. Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily. Cell. 56, 855-865 (1989).
  7. Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion. J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).
  8. McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor. J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).
  9. Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro. J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).
  10. Avoort, H. G. v. a. n. d. e. r. Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses. J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).
  11. Kilpatrick, D. R. Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues. J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).

Play Video

Cite This Article
Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Particle Agglutination Method for Poliovirus Identification. J. Vis. Exp. (50), e2824, doi:10.3791/2824 (2011).

View Video