Caractérisation des mécanismes moléculaires de la<em> In vivo</em> UV induit la cataracte
Summary
La cataracte est la principale cause de cécité dans le monde. Rayonnement solaire ultraviolet (UV) est le principal facteur de risque pour le développement de la cataracte. Un modèle animal de loin la cataracte rayons UV-B induite a été développé. Dans cet article, nous décrivons les méthodes d'enquête de la formation de la cataracte: l'exposition aux rayons UV, RT-PCR quantitative et immunohistochimie.
Abstract
La cataracte est la principale cause de cécité dans le monde 1. L'Organisation mondiale de la santé définit la cataracte comme une opacification du cristallin de l'œil qui empêche le transfert de la lumière. La cataracte est une maladie multifactorielle associée au diabète, le tabagisme, le rayonnement ultraviolet (UV), l'alcool, les radiations ionisantes, les stéroïdes et l'hypertension. Il existe des preuves expérimentales 2-4 et épidémiologique 5,6 que le rayonnement UV provoque la cataracte. Nous avons développé un modèle animal pour les rayons UV B de la cataracte induite dans les deux 7 anesthésiés et non anesthésiés animaux 8.
Le seul remède est la chirurgie de la cataracte, mais ce traitement n'est pas accessible à tous. Il a été estimé qu'un délai d'apparition de la cataracte pendant 10 ans pourrait réduire le besoin de chirurgie de la cataracte de 50% 9. Pour retarder l'incidence de la cataracte, il est nécessaire de comprendre les mécanismes de formation de la cataracte et de trouver stratégie de prévention efficacegies. Parmi les mécanismes de développement de la cataracte, l'apoptose joue un rôle crucial dans l'initiation de la cataracte chez les humains et les animaux 10. Notre objectif a récemment été l'apoptose dans l'objectif comme le mécanisme de développement de la cataracte 8,11,12. Il est prévu qu'une meilleure compréhension de l'effet des rayons UV sur la voie de l'apoptose offrira des possibilités pour la découverte de nouveaux médicaments pour prévenir la cataracte.
Dans cet article, nous décrivons comment la cataracte peut être induite expérimentalement par l'exposition in vivo au rayonnement UV-B. En outre RT-PCR et immunohistochimie sont présentés comme des outils pour étudier les mécanismes moléculaires des rayons UV-B induite par la cataracte.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cet article décrit les méthodes qui permettent à étudier les événements moléculaires qui se produisent au cours de rayons UV-B induite par la cataracte.
Considérant que la plupart des informations disponibles pour in vivo induite par les rayons UV de la cataracte a été dérivée à partir d'expériences sur les albinos Sprague-Dawley 7, 16, 17, 18, 19, nous avons décidé d'utiliser l'albinos Sprague-Dawley rats dans l'étude actuelle…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par le Karolinska Institutet KID-financement, Autorité suédoise de protection contre les radiations, Karolinska Institutet Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, Saint-Erik Eye Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V: s och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
| Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
| Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
| Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
| Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
| 3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
| NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
| p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
| Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
| Agarose | Sigma | A5093 | |
| Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
| Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
| 1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
| iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
| 96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
| MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
| Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
| Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
| Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
| Vectashield | Vector Laboratories | ||
| Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
| Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
| TBE buffer 10x | Promega | V4251 |
References
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