の分子機構のキャラクタリゼーション<emインビボ></em> UVR誘発性白内障
Summary
白内障は世界の失明の主要な原因である。太陽紫外線（UVR）は白内障開発のための主要な危険因子である。遠くUVR-B誘発白内障の動物モデルが開発されました。 UVR、定量的RT-PCR法と免疫組織化学への暴露：この記事では、白内障の調査のための方法を説明します。
Abstract
白内障は、世界1の失明の主要な原因である。世界保健機関（WHO）は、光の伝達を妨げ、眼のレンズの混濁として白内障が定義されています。白内障は、糖尿病、喫煙、紫外線照射（UVR）、アルコール、電離放射線、ステロイドや高血圧に関連付けられている多因子疾患である。強い実験2-4および疫学的証拠は、UVR 5,6は白内障引き起こすことがあります。我々は麻酔7及び非麻酔動物8の両方でB UVR誘発白内障のための動物モデルを開発しました。
白内障のための唯一の治療法は手術ですが、この治療法はすべてにアクセスすることはできません。それは10年間の白内障の発症の遅延が50％9で白内障手術の必要性を減らすことができると推定されている。白内障の発症を遅延させるには、それは白内障形成のメカニズムを理解し、効果的な予防戦略を見つけるために必要とされるegies。白内障開発のためのメカニズムの中で、アポトーシスは、ヒトおよび動物10の白内障の開始に重要な役割を果たしている。我々の焦点は、最近白内障開発8,11,12するためのメカニズムとしてレンズのアポトーシスとなっています。これはアポトーシス経路上のUVRの効果の理解は白内障防ぐための新たな医薬品の発見の可能性を提供することが予想されます。
本稿では、実験的にUVR-Bへのin vivoでの暴露にによって誘導することができる方法白内障について説明します。さらにRT-PCR法と免疫組織化学は、UVR-B誘発白内障の分子メカニズムを研究するためのツールとして提示されます。
Protocol
1。紫外線照射暴露前の15分には、腹腔内注射で90 mg / kgのKetalar（ケタミン）及び10 mg / kg Rompun（キシラジン）の混合物で雌Sprague-Dawleyラットを麻酔。 ラットの拘束に動物を置き、トランクスクイズ13を発生させることなく、ラットの固定までベルトを締めます。 散瞳を誘導するために、ラットの両眼にMydriacyl（トロピカミド）、10 mg / mlのを植え付ける。 片…
Representative Results
測定値の変動のさまざまな源は分散分析を用いて推定された、それは動物ごとに3つの測定値を考慮すると測定のための分散は動物のそれの15％のオーダーであることがわかった。したがって、レンズ全体の分析を考慮すれば、精度を向上させることはできません。直交テストは120時間の待ち時間の間隔対短い待ち時間間隔のカスパーゼ-3メッセージの統計学的に有意なコントラストを明らか?…
Discussion
本稿では、UVR-B誘発白内障の間に発生する分子事象を研究する有効な方法について説明します。
生体 UVR誘発性白内障で使用可能なほとんどの情報がアルビノSprague-Dawleyラット7、16、17、18、19日の実験から得られたことを、考慮して、現在の研究ではアルビノSprague-Dawleyラットを使用することを決めた。ラットの年齢は6週齢であった。性別は男性…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
sのOCH Drottning Viktorias Frimurarstiftelse：この作品は、カロリンスカ研究所KID-資金調達、スウェーデン放射線防護機関、カロリンスカ研究所アイ研究財団、ガンOCH BERTIL Stohnes Stiftelse、聖エリックの眼科病院研究財団、Ögonfonden、KonungグスタフVによってサポートされていました。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
| Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
| Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
| Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
| Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
| 3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
| NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
| p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
| Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
| Agarose | Sigma | A5093 | |
| Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
| Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
| 1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
| iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
| 96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
| MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
| Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
| Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
| Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
| Vectashield | Vector Laboratories | ||
| Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
| Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
| TBE buffer 10x | Promega | V4251 |
References
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Cite This Article
Galichanin, K., Talebizadeh, N., Söderberg, P. Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract. J. Vis. Exp. (69), e4016, doi:10.3791/4016 (2012).