Il western blot

Western Blotting viene utilizzato per identificare la presenza di proteine specifiche in campioni separati elettroforeticamente. Dopo la separazione con una tecnica nota come elettroforesi su gel di poliacrilammide dodecilsolfato di sodio, o SDS-PAGE, il trasferimento occidentale viene utilizzato per spostare le proteine da un gel di poliacrilammide su un pezzo di membrana che intrappola le proteine nelle rispettive posizioni. Successivamente, le membrane vengono sonde con anticorpi in un processo chiamato immunboblotting. L’immunoblotting utilizza il legame anticorpo-proteina e anticorpo-anticorpo attraverso specifici siti di riconoscimento, fornendo l’elevata specificità necessaria per identificare una singola proteina. La rilevazione degli anticorpi avviene utilizzando sistemi reporter che includono l’uso di enzimi. Gli enzimi possono essere attaccati all’estremità di un anticorpo e reagire con i substrati per produrre cambiamenti di colore o luce. Questi segnali possono quindi essere ripresi e quantificati utilizzando un processo chiamato densitometria.

Questo video-articolo presenta una panoramica della tecnica western blot descrivendo il trasferimento occidentale, l’uso del rilevamento degli anticorpi e l’analisi delle immagini. I passaggi coinvolti nel trasferimento occidentale come l’assemblaggio del sandwich di trasferimento e le condizioni di trasferimento sono discussi in dettaglio, nonché la teoria alla base del legame anticorpale e il rilevamento di tali anticorpi. Le ampie applicazioni di questa tecnica sono descritte attraverso diversi esempi tra cui la rilevazione di interazioni proteina-proteina e l’identificazione di singole proteine all’interno di complessi proteici.