Western Blot

Western Blot se utiliza para identificar la presencia de proteínas específicas en muestras separadas electroforéticamente. Después de separación mediante una técnica conocida como electroforesis en gel de poliacrilamida sodio dodecil sulfato, o SDS-PAGE, transferencia occidental se utiliza para mover las proteínas de un gel de poliacrilamida en un pedazo de membrana que atrapa las proteínas en sus respectivos localizaciones. A continuación, las membranas son sondeadas con los anticuerpos en un proceso llamado immunboblotting. Immunoblotting utiliza anticuerpos de proteínas y de unión de anticuerpos anticuerpos a través de sitios de reconocimiento específicos, proporcionando la alta especificidad necesaria para la identificación de una sola proteína. La detección de anticuerpos lleva a cabo utilizando sistemas de reportero que incluye el uso de enzimas. Las enzimas pueden fijarse al final de un anticuerpo y reaccionan con los sustratos para producir cambios de color o luz. Estas señales entonces pueden ser reflejadas y cuantificados mediante un proceso llamado densitometría ósea.

Este artículo de vídeo presenta un resumen de la técnica de inmunoblot describiendo transferencia western, el uso de la detección del anticuerpo y análisis de imágenes. Los pasos involucrados con la transferencia western como la Asamblea de los sandwich de transferencia y condiciones de transferencia se discuten en detalle, así como la teoría detrás de unión de anticuerpos y detección de los anticuerpos. La aplicación amplia de esta técnica se describe a través de varios ejemplos, incluyendo la detección de las interacciones proteína-proteína y la identificación de proteínas individuales dentro de complejos de la proteína.