Summary

Acquisition de haute qualité vidéo numérique de<em> Drosophila</em> Comportements larvaire et adulte à partir d'un point de vue latéral

Published: October 04, 2014
doi:

Summary

Nous décrivons ici une technique simple et largement accessible microscopie à acquérir la vidéo numérique de haute qualité de la drosophile adulte et phénotypes mutants larvaires dans une perspective latérale.

Abstract

Drosophila melanogaster est un système de modèle expérimental puissant pour étudier la fonction du système nerveux. Les mutations génétiques qui provoquent un dysfonctionnement du système nerveux produisent souvent des larves viables et les adultes qui ont locomotion phénotypes défectueux qui sont difficiles à décrire de manière adéquate avec le texte ou représenter complètement avec une seule image photographique. Les formes actuelles de l'édition scientifique, cependant, soutiennent la présentation de supports vidéo numérique comme documentation supplémentaire pour accompagner un manuscrit. Nous décrivons ici une technique simple et largement accessible microscopie pour l'acquisition vidéo numérique de haute qualité des deux phénotypes larves et les adultes de Drosophila du point de vue latérale. Vidéo de la locomotion des larves et des adultes dans une vue de côté est avantageuse car elle permet l'observation et l'analyse des distinctions et de subtiles variations dans les comportements aberrants des locomotives. Nous avons utilisé avec succès la technique de visualiser et de quantifier aberrant rampant comportements en troisième stade larvaire, en plus de phénotypes mutants et les comportements des adultes, y compris le toilettage.

Introduction

Le fruit mouche Drosophila melanogaster commun est un système de modèle expérimental puissant pour étudier la fonction du système nerveux 1-3. Conservation évolutive de la structure et la fonction du système nerveux chez les humains, ainsi que la facilité de la manipulation génétique et une vaste gamme d'outils génétiques chez la drosophile fait l'organisme de première pour modéliser les maladies neurodégénératives humaines 4. Les mutations génétiques qui provoquent un dysfonctionnement du système nerveux entraînent souvent des larves mutant viable et adultes de Drosophila avec une altération de la locomotion. Phénotypes observés dans le système nerveux mutants défectueux, notamment le taux de locomotion, coordination anormale, et les mouvements spasmodiques chez les adultes, ainsi que les déficits de la contraction péristaltique de la paroi musculature du corps, et une paralysie partielle des larves réduits. Ces phénotypes ont été exploités dans le développement à haut débit de cribles génétiques et des dosages de la locomotion des larves mutant 5, 6 et 7 à 10 adultes de Drosophila visant à quantifier l'altération de la locomotion et l'identification de gènes nécessaire pour la fonction du système nerveux. Bien que ces approches sont extrêmement utiles pour quantifier les comportements locomotive larves et les adultes, ils ne parviennent pas à transmettre des informations qualitatives sur chaque comportement aberrant spécifique. Par exemple, alors que la troisième stade larvaire mutant peut présenter des paramètres de locomotion modifiées dans un test de comportement, il peut être difficile de savoir si cela est le résultat des altérations de contractions péristaltiques rythmiques pendant le cycle de ramper, manque général de coordination, ou une paralysie partielle du corps postérieur musculature de la paroi. Nous décrivons ici une technique simple et largement accessible microscopie pour l'acquisition vidéo numérique de haute qualité de la drosophile adulte et phénotypes de locomotives larvaires dans une perspective latérale. Vidéo numérique acquise à partir d'un point de vue latérale permet l'observation directe et l'analyse des distinctions subtiles dans locomotivcomportements e d'une plus informative vue latérale orientation.

Protocol

1 Le système de Microscope stéréo Remarque: Bien que ce protocole est facilement adaptable à n'importe quel système de microscope stéréo couplé à un appareil photo numérique avec la possibilité d'acquérir la vidéo, les détails sont fournis sur le système utilisé dans notre laboratoire (Table des Matières / Équipement). Acquisition vidéo numérique en utilisant un microscope stéréoscopique trinoculaire couplé à un appareil photo numérique commercial….

Representative Results

Nous avons utilisé avec succès cette technique pour acquérir et quantifier le phénotype comportemental larvaire associée à la perte de fonction du gène de la stathmine (figure 2) 14. Le gène code pour une protéine stathmine réglementaire microtubules qui partitionne la tubuline des pools de tubuline soluble, et se lie microtubules et favorise leur démontage 15,16. Stathmin fonction est nécessaire pour maintenir l'intégrité des m…

Discussion

La force de Drosophila melanogaster comme un système modèle pour l'étude de la fonction du système nerveux provient en grande partie de la convergence des outils génétiques puissants disponibles et la large gamme de tests comportementaux robustes développé. Nous présentons ici une technique simple et largement accessible microscopie pour l'acquisition vidéo numérique de haute qualité de la drosophile adulte et phénotypes de locomotives larvaires dans une perspective latérale. Nous…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Les auteurs tiennent à remercier Alexandra Opie pour l'assistance technique et le soutien, James Barton pour fournir la vidéo narration, et Ramona Flatz et Joellen Sweeney pour apparaître dans la vidéo qui l'accompagne. Ce travail a été financé par le Fonds fiduciaire de bienfaisance MJ Murdock (Grant No. 2012205 JED).

Materials

Trinocular Stereozoom Microscope Olympus Corporation SZ6145TR ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount
1X C-mount Leeds Precision Instruments LSZ-1XCMT2
Digital Camera Coupler (43mm thread) Qioptiq Imaging Solutions 25-70-10-02
58mm to 48mm Step Down Ring B&H Video GBSDR5848
48mm to 43mm Step Down Ring B&H Video GBSDR4843
Lensmate Adapter Kit for Canon G10 LensMateOnline.com
Canon PowerShot G10 Digital Camera Canon U.S.A., Inc.
1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette Denville Scientific U8650-4

References

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Cite This Article
Zenger, B., Wetzel, S., Duncan, J. Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective. J. Vis. Exp. (92), e51981, doi:10.3791/51981 (2014).

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