Summary

Aquisição de Vídeo de Alta Qualidade Digital de<em> Drosophila</em> Larvais e adultas Comportamentos de uma perspectiva lateral

Published: October 04, 2014
doi:

Summary

Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos mutantes larvais de uma perspectiva lateral.

Abstract

Drosophila melanogaster é um poderoso sistema de modelo experimental para o estudo da função do sistema nervoso. As mutações genéticas que causam a disfunção do sistema nervoso muitas vezes produzem larvas viáveis ​​e adultos que têm locomoção fenótipos defeituosos que são difíceis de descrever adequadamente com texto ou representar completamente com uma imagem fotográfica única. Atuais modos de publicação científica, no entanto, apoiar a apresentação de mídia de vídeo digital como material suplementar para acompanhar um manuscrito. Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de ambos os fenótipos de Drosophila larvas e adultos a partir de uma perspectiva lateral. Vídeo de locomoção das larvas e adultos a partir de uma visão lateral é vantajosa porque permite a observação e análise das distinções sutis e variações nos comportamentos aberrantes de locomotivas. Temos utilizado com sucesso a técnica de visualizar e quantificar aberrant rastejando comportamentos em larvas de terceiro estádio, além de fenótipos e comportamentos mutantes adultos incluindo o grooming.

Introduction

A fruta comum mosca Drosophila melanogaster é um poderoso sistema de modelo experimental para o estudo da função do sistema nervoso 1-3. Conservação evolutiva da estrutura e função do sistema nervoso, com os seres humanos, assim como a facilidade da manipulação genética e uma vasta variedade de ferramentas genéticas torna o organismo Drosophila estreia para modelar doenças neurodegenerativas humano 4. As mutações genéticas que causam disfunção do sistema nervoso, muitas vezes resultam em larvas mutante viável e adulto de Drosophila com locomoção diminuída. Fenótipos observados no sistema nervoso mutantes defeituosos incluem taxa de locomoção, coordenação aberrante, e os movimentos espásticas em adultos, assim como os défices de contracção peristáltica da musculatura da parede do corpo, e paralisia parcial de larvas reduzida. Estes fenótipos foram explorados no desenvolvimento de telas genéticas de alto rendimento e ensaios de locomoção das larvas 5 mutante, 6 e adulto de Drosophila 7-10 destina-se a quantificar a disfunção locomoção e a identificação de genes necessários para a função do sistema nervoso. Embora essas abordagens são extremamente úteis para quantificar comportamentos locomotiva larvas e adultos, eles não conseguem transmitir informações qualitativas sobre cada comportamento aberrante específico. Por exemplo, enquanto as larvas de terceiro estádio mutante pode apresentar parâmetros de locomoção alterados em um ensaio comportamental, pode não ser claro se este é o resultado de alterações nas contrações peristálticas rítmicas durante o ciclo de rastreamento, em geral falta de coordenação ou paralisia parcial do corpo posterior musculatura da parede. Aqui nós descrevemos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos locomotiva larvais de uma perspectiva lateral. O vídeo digital adquirido de uma perspectiva lateral, permite a observação direta e análise de distinções sutis em locomotive comportamentos de uma orientação mais informativa visão lateral.

Protocol

1 O sistema de microscópio estéreo Nota: Apesar de este protocolo é facilmente adaptável a praticamente qualquer sistema de microscópio estéreo acoplado a uma câmera digital com a capacidade de adquirir vídeo, são fornecidos detalhes sobre o sistema utilizado em nosso laboratório (Tabela de Materiais / Equipamentos). Adquirir vídeo digital utilizando um microscópio estéreo trinocular acoplado a uma câmera digital comercial. A fim de acoplar a câmera digita…

Representative Results

Nós utilizamos com sucesso desta técnica para adquirir e quantificar o fenótipo comportamental larval associada com a perda de função do gene stathmin (Figura 2) 14. O gene codifica uma proteína stathmin regulamentar microtúbulos que particiona dímeros de tubulina de piscinas de tubulina solúvel, e liga os microtúbulos e promove a sua desmontagem 15,16. Stathmin função é necessária para manter a integridade dos microtúbulos nos axónios dos nervos p…

Discussion

Força Drosophila melanogaster 's como um sistema modelo para estudar a função do sistema nervoso deriva em grande parte da convergência das poderosas ferramentas genéticas disponíveis e da ampla gama de ensaios comportamentais robustos desenvolvidos. Aqui apresentamos uma técnica de microscopia simples e amplamente acessível para a aquisição de vídeo digital de alta qualidade de Drosophila adulto e fenótipos locomotiva larvais de uma perspectiva lateral. Temos utilizado com sucesso esta…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Os autores gostariam de agradecer Alexandra Opie para assistência técnica e apoio, James Barton para fornecer vídeo narração e Ramona Flatz e Joellen Sweeney para aparecer no vídeo em anexo. Este trabalho foi financiado pela Fundação de Caridade MJ Murdock (Grant n º 2012205 para JED).

Materials

Trinocular Stereozoom Microscope Olympus Corporation SZ6145TR ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount
1X C-mount Leeds Precision Instruments LSZ-1XCMT2
Digital Camera Coupler (43mm thread) Qioptiq Imaging Solutions 25-70-10-02
58mm to 48mm Step Down Ring B&H Video GBSDR5848
48mm to 43mm Step Down Ring B&H Video GBSDR4843
Lensmate Adapter Kit for Canon G10 LensMateOnline.com
Canon PowerShot G10 Digital Camera Canon U.S.A., Inc.
1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette Denville Scientific U8650-4

References

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Cite This Article
Zenger, B., Wetzel, S., Duncan, J. Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective. J. Vis. Exp. (92), e51981, doi:10.3791/51981 (2014).

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