Impression cytologie de la zone d'essuie-glace du couvercle
Summary
We collected, stained and imaged cells from the conjunctiva of the inner eyelid margin of human subjects. By characterizing cell morphology and metabolic activity, this method may further our understanding of dry eye and the role that friction between the ocular surfaces may play in perceiving ocular discomfort.
Abstract
Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The optimization of a method of collecting, staining and imaging cells from the LW region using impression cytology (IC) is described in this study. Cells are collected from the inner surface of the upper eyelid of human subjects using hydrophilic polytetrafluoroethylene (PTFE) membranes, and stained with cytological dyes to reveal the presence of goblet cells, mucins, cell nuclei and various degrees of pre- and para-keratinization. Immunocytochemical dyes show cell esterase activity and compromised cell membranes by the use of a confocal scanning laser microscope. Up to 100 microscopic digital images are captured for each sample and stitched into a high-resolution, large scale image of the entire IC span. We demonstrate a higher sensitivity of IC than reported before, appropriate for identifying cellular morphologies and metabolic activity in the LW area. To our knowledge, this is the first time this selection of fluorescent dyes was used to image LW IC membranes. This protocol will be effective in future studies to reveal undocumented details of the LW area, such as assessing cellular particularities of contact lens wearers or patients with dry eye or lid wiper epitheliopathy.
Introduction
La paupière supérieure humaine exécute environ 10.000 clignote chaque jour 1, avec seulement 1 – région conjonctival 2 mm étroite opposés du globe oculaire. En raison de son mouvement d'essuyage pendant le clignotement, cette partie de la marge de couvercle a été appelé le "couvercle essuie – glace" région 2. On suppose que le frottement est augmenté dans cette région pendant le clignotement habituelle, en raison du couvercle d'essuyage dans le monde entier. Cela peut jouer un rôle important dans le confort oculaire. Porteurs de lentilles de contact dans l' expérience particulière gêne oculaire et ceci est l' une des principales raisons pour cesser port des lentilles 3. Lorsqu'une lentille de contact est placée sur l'oeil, le coefficient de frottement entre le matériau de la lentille et la surface oculaire a été montré pour changer 4. Il existe des preuves pour suggérer que les symptômes de la sécheresse pourraient être liés à ce frottement modifié 2,5,6.
Cette association peut aussi se traduire par des phénomènes observables cliniquement, notamment couvercle wipar épithéliopathie (LWE), également appelé paupière supérieure marge coloration (ULMS) 6. LWE est un signe précoce d'irritation oculaire et un prédicteur potentiel de la maladie de l'oeil sec. On a observé et mesuré par la coloration vitale des régions de marge de couvercle supérieure et inférieure. Bien que ce système de classement 2 et sa validité clinique (c. -à- corrélation avec les symptômes subjectifs) sont encore en débat, gêne oculaire reste une énigme pour les cliniciens et les scientifiques et, surtout, un inconvénient pour les patients.
À ce jour, on sait peu sur les variations cliniquement pertinentes dans le (sous-) anatomie cellulaire et de la physiologie du couvercle zone d'essuie – glace 7 et un seul rapport fait appel à des méthodes cytologiques 8. Impression cytologie (IC) a été employé pendant plus de 40 ans pour recueillir des cellules de la surface épithéliale de la bulbaire ou conjonctive tarsienne par application d'une membrane 9,10. Lors de l'enlèvement, les cellules adhérentes subissent cytological coloration et d'imagerie microscopique. En raison des différences anatomiques et cellulaires de la région d'essuie-glace de couvercle, cette technique nécessite l'optimisation.
Protocol
Representative Results
Discussion
Impression cytologique est généralement effectuée sur la conjonctive bulbaire, en utilisant des membranes d'ester de cellulose mixte. Les échantillons sont coupés à la taille des feuilles de matériau en vrac, stérilisées, appliqué et retiré de la surface de la conjonctive à l'aide de pinces. En utilisant le même matériau de membrane, d' un dispositif à circuit intégré commandé par le piston a récemment été conçue pour correspondre à la géométrie de surface de la conjonctive bulbaire,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We would like to acknowledge our colleague Dr. Jalaiah Varikooty who provided insight and expertise on the topic of the lid wiper, that greatly assisted this research.
Materials
| Alcian Blue, 1% in 3% Acetic Acid | Sigma | B8438-250ML | |
| Hematoxylin, Gill 1 | Sigma | GHS116-500ML | |
| Papanicolaou stain, OG-6 | Sigma | HT40116-500 ml | |
| Papanicolaou stain, Modified EA | Sigma | HT40232-1L | |
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Life Technologies | L-3224 | contains ethidium homodimer-1 and Calcein AM dyes |
| Alcaine (0.5% proparacaine hydrochloride) | Alcon | ||
| Millicell Cell Culture Insert, 12 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 µm | EMD Millipore | PICM01250 | |
| 35 mm Glass Bottom Dishes | MatTek Corporation | P35G-0-20-C |
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