We collected, stained and imaged cells from the conjunctiva of the inner eyelid margin of human subjects. By characterizing cell morphology and metabolic activity, this method may further our understanding of dry eye and the role that friction between the ocular surfaces may play in perceiving ocular discomfort.
Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The optimization of a method of collecting, staining and imaging cells from the LW region using impression cytology (IC) is described in this study. Cells are collected from the inner surface of the upper eyelid of human subjects using hydrophilic polytetrafluoroethylene (PTFE) membranes, and stained with cytological dyes to reveal the presence of goblet cells, mucins, cell nuclei and various degrees of pre- and para-keratinization. Immunocytochemical dyes show cell esterase activity and compromised cell membranes by the use of a confocal scanning laser microscope. Up to 100 microscopic digital images are captured for each sample and stitched into a high-resolution, large scale image of the entire IC span. We demonstrate a higher sensitivity of IC than reported before, appropriate for identifying cellular morphologies and metabolic activity in the LW area. To our knowledge, this is the first time this selection of fluorescent dyes was used to image LW IC membranes. This protocol will be effective in future studies to reveal undocumented details of the LW area, such as assessing cellular particularities of contact lens wearers or patients with dry eye or lid wiper epitheliopathy.
2 mm dar konjonktiva bölge göz küre karşı – insan üst göz kapağı sadece 1 ile 10,000 yanıp her gün yaklaşık 1 yürütür. Yanıp sırasında silme hareketi nedeniyle, göz kapağı kenarında bu bölümü "kapak silecek" bölgesini 2 olarak adlandırılmıştır. Sürtünme yüzünden dünya üzerinde silme kapak, alışılmış kırpma sırasında bu bölgede yüksek olduğu varsayılmaktadır. Bu göz konfor önemli bir rol oynayabilir. Kontakt lens özellikle deneyim göz rahatsızlık kullananlar ve bu mercek 3 giymek durdurması için birincil nedenlerinden biridir. Bir kontakt lens göze yerleştirildiğinde, lens materyali ve göz yüzeyi arasındaki sürtünme katsayısı 4 değiştirme gösterilmiştir. Kuruluk belirtileri bu değiştirilmiş sürtünme 2,5,6 ilişkili olabileceğini gösteren kanıtlar vardır.
Bu ilişki aynı zamanda klinik olarak gözlemlenebilir olayların yansıması olabilir, özellikle kapak wiepitelyopati (LWE) da denilen üst kapak marjı boyama (ULMS) 6 başına. LWE oküler irritasyon erken bir belirtisi ve kuru göz hastalığı için potansiyel bir belirleyicisidir. Bu görülen üst ve alt kapak kenarında bölgelerinin önemli bir boyama ile ölçülür. Bu derecelendirme sistemi 2 ve klinik geçerliliği (yani öznel belirtiler ile korelasyon) tartışma halen iken, göz rahatsızlığı, hem doktorlar ve bilim adamları için bir bilmece kalır ve en önemlisi, hastalar için bir rahatsızlık.
To-date, küçük kapak silecek alanının 7 (alt), hücresel anatomi ve fizyoloji klinik-alakalı varyasyonları hakkında bilinmektedir ve sadece tek bir rapor sitolojik yöntemler 8 kullanmaktadır. Gösterim sitoloji (IC) bir zar 9,10 uygulanması ile bulber veya tarsal konjonktiva epitel yüzeyinden hücreleri toplamak için 40 yıldır istihdam edilmiştir. çıkarılması üzerine, yapışan hücreler c geçmesiytological boyama ve mikroskopik görüntü. Nedeniyle kapak silecek bölgedeki anatomik ve hücresel farklılıkları, bu teknik optimizasyon gerektirir.
Gösterim sitoloji genellikle karışık selüloz ester membranlar kullanılarak, konjonktivada üzerinde gerçekleştirilir. Numuneler, dökme malzeme levhalar boyutta kesilir sterilize forseps kullanılarak konjunktival yüzeye uygulanan ve kaldırılır. Aynı membran malzeme kullanarak, bir piston kontrollü IC cihaz son zamanlarda uygulamalar 13 arasında tutarlı bir baskı bulber konjonktiva yüzey geometrisini maç ve korumak için tasarlanmıştır. Bu yaklaşımlar bölge silecek dar, belirgin kavis…
The authors have nothing to disclose.
We would like to acknowledge our colleague Dr. Jalaiah Varikooty who provided insight and expertise on the topic of the lid wiper, that greatly assisted this research.
Alcian Blue, 1% in 3% Acetic Acid | Sigma | B8438-250ML | |
Hematoxylin, Gill 1 | Sigma | GHS116-500ML | |
Papanicolaou stain, OG-6 | Sigma | HT40116-500 ml | |
Papanicolaou stain, Modified EA | Sigma | HT40232-1L | |
Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Life Technologies | L-3224 | contains ethidium homodimer-1 and Calcein AM dyes |
Alcaine (0.5% proparacaine hydrochloride) | Alcon | ||
Millicell Cell Culture Insert, 12 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 µm | EMD Millipore | PICM01250 | |
35 mm Glass Bottom Dishes | MatTek Corporation | P35G-0-20-C |