꼬마 선 충 에 경도 이미징을 위한 미세 플랫폼

Summary

이 문서에서는 사용자 지정 미세 장치를 채용 하는 개별 벌레의 라이브 이미징을 설명 합니다. 장치에서 여러 벌레는 개별적으로 별도 챔버, 다양 한 생물 학적 과정의 다중화 경도 감시 허용에 국한 됩니다.

Abstract

지난 10 년간에서 미세 꼬마 선 충, 선 충 류 등 작은 동물을 연구에 적용 된 기술과의 정밀 하 게 제어 기능을 제공 하는 편리한 라이브 이미징 플랫폼으로 유용한 증명 실시간으로 실험 조건입니다. 이 문서에서는 개별 웜 WormSpa, 이전에 게시 사용자 지정 미세 장치 채용의 라이브 이미징을 설명 합니다. 장치에서 여러 벌레는 개별적으로 별도 챔버, 다양 한 생물 학적 과정의 다중화 경도 감시 허용에 국한 됩니다. 기능을 설명 하기 위해 수행 하는 병원 성 박테리아, 장치에 웜 감염 했다 그리고 면역 반응 유전자와 달걀 누워의 표현의 역학 개인에서 지속적으로 감시 되었다 증거의 원리 실험 동물입니다. 단순한 설계와 동작이 미세 기반 실험 이전 경험을 가진 사용자에 게 적합 합니다. 우리는이 이렇게 잘 정의 된 조건 하에서 생물 학적 과정의 종 적 관찰에 관심이 많은 연구원을 위한 도움이 될 것입니다 제안 합니다.

Introduction

환경에서 변화 유도 및 특정 유전자^1,2의 식의 억제를 동반 하는 유전 프로그램의 활성화로 이어질 수 있습니다. 이러한 운동 변화 조직 같은 동물 및 다른 동물 사이 중 변수를 있을 수 있습니다. 같은 유전 프로그램의 연구는 따라서 개별 동물의 경도 이미징 허용 및 환경 조건의 정확한 동적 제어를 제공 하는 방법에 대 한 호출 합니다.

최근 몇 년 동안, ﹙ 유체 장치 응답 및 작은 동물, 벌레, 파리, 물 곰 그리고 더 많은^3,,45,6,^{를 포함 하 여 행동의 여러 측면을 연구 하는 데 사용 되었습니다. 7}. 응용 프로그램 포함, 예를 들어 깊은 형질, optogenetic 화학 자극에 응답에 신경 활동의 기록 하 고 운동 등 펌핑^8,,910 모터 동작 추적 ^{, 11}.

미세-기반 접근 개최 지역 microenvironment의 유지 보수를 허용 하는 유연한 디자인의 정확한 동적 제어를 포함 한 환경 신호에 응답의 장기 경도 이미징 혜택을 수 있는 많은 속성 별도 숙소, 및 이미징에 대 한 유리한 속성에 개별 동물. 그러나, 그들의 잘 존재에 불리 한 영향을 최소한의 오랜 시간에 대 한 미세 챔버에 동물을 유지 하는 것은 실험의 실행에서 뿐만 아니라 미세 소자의 디자인에 특별 한 주의 요구 하는 도전입니다.

여기 WormSpa, 꼬마 선 충의 경도 이미징 미세 장치를 사용 하 여를 설명합니다. ⁵ 개별 웜 챔버에 국한 됩니다. 액체와 세균 현 탁 액의 지속적인 낮은 흐름 벌레가 잘 먹이 충분히 좋은 건강을 유지 하 고 스트레스를 완화 하는 활성는 챔버의 구조로 벌레 알을 낳 기를 보장 합니다. 디자인의 단순 하 고 WormSpa의 그들의 자신의 연구 계획에이 장치를 통합 하는 마이크로에 이전 경험을 가진 연구원을 허용 해야 합니다.

Protocol

프로토콜 아래 WormSpa5, 벌레의 경도 이미징에 대 한 이전 설명 미세 장치를 사용합니다. WormSpa (CAD 파일 요청 시 저자에 게 서 얻을 수 있는 시작)의 제조는 간단 하지만 일부 전문성을 요구 한다. 대부분의 경우, 제작 쉽게 수행할 수 있습니다 핵심 시설에 의해 또는 그러한 서비스를 제공 하는 상업 회사에 의해. 장치를 조작 하는 경우 기능 높이 50 µ m 지정 있는지 확인 하십시오.<…

Representative Results

(46 시간 게시물 25 ° C에서 L1 애벌레로)12 프로토콜에 설명 된 대로 장치에 로드 된 젊은 성인 벌레를 나이 동기화. 벌레는 개별적으로 병원 체에 동물의 응답의 경도 측정을 사용 하면 별도 채널에 위치 했다. 실험 성공 하면 대부분 웜 실험의 기간에 대 한 그들의 채널에 남아 있습니다. 이 경우 개별 벌레의 이미지는 단순히 동물을 적극적으로 찾이 필요?…

Discussion

미세 도구 공부 벌레에 여러 혜택을 제공 합니다. PDMS에 이미징 장치 표준 NGM 천 판에 비해 더 높은 영상 품질을 제공 합니다. 대조적으로 전통적인 방법 동물 접시에서 고른 및 이미징 위한 현미경 슬라이드에 장착 된 단일 벌레에서 여러 개의 이미지를 취할 수 있습니다. 또한, 웜 거주 하는 microenvironment 상수 또는 원하는 정확한 환경 구성 및 동물의 응답 사이의 매핑 허용으로 변조 된 보관할 수 …

Materials

WormSpa	N/A	N/A	The CAD file for WormSpa is available from the Levine lab.
Compound Microscope	Zeiss	AxioObserver Z1	An inverted fluorescence microscope with a motorized stage
Syringe Pump	New Era Pump Systems	NE-501
Tubing	SCI Scientific Commodities Inc.	BB31695-PE/5	0.034” (0.86 mm) I.D. x 0.052” (1.32 mm) O.D
Syringe Tip	CMLsupply	901-20-050	20 Gauge x 1/2” blunt tip stainless steel canula
Syringe Filter	PALL	4650	Acrodisc 32 mm Syringe Filter with 5 um Supor Membrane
Syringe	Qosina	C3307	10 mL Male Luer Lock Syringe
3 Way Valve	ColeParmer	FF-30600-23	Large-bore 3-way, male-lock, stopcocks, 10/pack, Non-sterile
Dowel Pin	McMaster-Carr	90145A317	18-8 Stainless Steel Dowel Pins (1/32" Dia. x 1/2" Lg.)
Low Binding Microcentrifuge Tube	Corning	CL S3206	0.65 mL low binding snap cap microcentrifuge tube