Antikor-bağımlı donanýmýn birincil insan hücrelerinde Zika şunun miktar
Summary
Biz insan serumu, birincil insan hücreleri ve enfeksiyon miktar nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu tarafından kullanarak Zika virüs enfeksiyonu önceden varolan bağışıklık dang virüs karşı etkisini değerlendirmek için bir yöntem açıklanmaktadır.
Abstract
Flavivirus Zika ve Guillain-Barré sendromu ve bebeklerde, microcephaly gibi nörolojik komplikasyonlara son ortaya çıkması ciddi genel güvenlik endişeleri getirdi. Son yeniden doğuş Zika virüs (ZIKV) öncelikle alanlarda nerede nüfus maruz kalmış ve öncesi dokunulmazlık için diğer yakından ilgili bir durumda olduğu gibi risk faktörleri arasında en ciddi tehdit, antikor bağımlı geliştirme (ADE) teşkil etmektedir flaviviruses, özellikle dang virüs (DENV). Burada, DENV karşı insan serum antikor ZIKV enfeksiyon birincil insan hücreleri veya hücre hatları üzerinde etkisini miktarının bir protokol açıklayın.
Introduction
Sivrisinekler yoluyla bulaşan viral hastalıklar arasında Zika enfeksiyon en klinik olarak önemli1biridir. Enfeksiyon flavivirus kullandığı, çoğu durumda, Aedes aegypti onun birincil vektör1,2ZIKV neden olur. Ancak, Aedes albopictus bazı ZIKV salgınlar3birincil bir vektör olarak bildirdin çalışma vardır. Enfeksiyon birçok durumda asemptomatik olmakla birlikte, hastalığın en yaygın belirtileri ateş, baş ağrısı ve kas ağrı2vardır. Herhangi bir tedavi veya aşı ZIKV enfeksiyonu için kullanılabilir ve mevcut tedavi çoğunlukla destek oluyor. ZIKV Güney Amerika’da son salgınları şiddetli vakalarda hastalık ve yaklaşık 20-fold microcephaly2adlı fetusa nörogelişimsel bozuklukta artışa yol açtı. Güney Amerika DENV ve Batı Nil virüsü gibi birkaç arboviruses endemik bir alan olduğu için diğer flavivirus(es) için önceden dokunulmazlık, ZIKV enfeksiyonlar ve hastalık şiddetinde bir rol oynar olup olmadığını araştırmak çok önemlidir.
Çağlar boyunca, virüs infektivite konak hücre makine almak ve antiviral yanıt bastırmak için onların şansını artırmak için farklı stratejiler geliştirmişlerdir. Biri en büyüleyici tüm ana bilgisayar önceden bağışıklık antikorlar yanında onların çoğaltma fenomen ADE4ile geliştirmek için virüs kullanımıdır. ADE DENV tüm dört serotipleri arasında iyi okudu ve viral titreleri ve hastalık sonucu5,6,7artırmak için kanıtlanmış oldu. Bir önceki tüp bebek çalışmada, önceden var olan birincil insan bağışıklık hücreleri8DENV bağışıklık nedeniyle ZIKV çoğaltma önemli enhancement göstermiştir. Biz de ZIKV çoğaltma primer hücre içinde geliştirmek için DENV önceden varolan antikor kapasitesini ölçmek için ilgili bir tüp bebek yöntemi gösterdi.
TCID-50 DENV nötralize için test edilir insan serum numuneleri geliştirdiğimiz protokolünü kullanan veya plak azaltma nötralizasyon testi (PRNT), ZIKV biyolojik ilgili hücre veya hücreleri ZIKV bulaşabilir dokulardan türetilmiş birlikte deneyleri.
Protocol
Representative Results
Discussion
Olan diğer DENV serotipi ADE için önde gelen DENV antikorların bir etkili aşı11gelişimine engel. ZIKV Flaviviridae, aynı ailesine ait ve diğer flaviviruses, özellikle DENV12ile önemli bir Homoloji vardır. Hem ZIKV hem de DENV için antikorları nötralize ana hedef çok yüksek yapısal ve Kuvaterner sırası Homoloji arasında iki virüs13,14,15hisse zarf proteindir. Y…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser cömertçe 1R21AI129881-01 (T.M.C. için) başlangıç fonlar Ulusal ortaya çıkan bulaşıcı hastalıklar laboratuvarları ve Boston Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Fetal Bovine Serum | GEMINI | 100-106 | |
| iCycler | BioRad | 785BR02188 | Model No. CFX96 Optics Module |
| Microfuge 18 Centrifuge | Beckman Coulter | 367160 | |
| Nanodrop-1000 | Thermoscientific | 1072 | |
| Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit | Qiagen | 204154 | Used for 1 step RT-qPCR |
| RNeasy RNA Isolation Kit | Qiagen | 74106 | Used for RNA extraction |
| RPMI-medium | Gibco | 11875093 |
References
- Hayes, E. B. Zika virus outside Africa. Emerging Infectious Diseases. 15, 1347-1350 (2009).
- Grard, G., et al. Zika virus in Gabon (Central Africa) – 2007: a new threat from Aedes albopictus. PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (2), 2681 (2014).
- Fauci, A. S., Morens, D. M. Zika Virus in the Americas–Yet Another Arbovirus Threat. New England Journal of Medicine. 374 (7), 601-604 (2016).
- Hawkes, R. A. Enhancement of the Infectivity of Arboviruses by Specific Antisera Produced in Domestic Fowls. Australian Journal of Experimental Biology and Medical Science. 42, 465-482 (1964).
- Musso, D., Gubler, D. J. Zika Virus. Clinical Microbiology Reviews. 29 (3), 487-524 (2016).
- Vaughn, D. W., et al. Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity. The Journal of Infectious Diseases. 181 (1), 2-9 (2000).
- Khandia, R., et al. Modulation of Dengue/Zika Virus Pathogenicity by Antibody-Dependent Enhancement and Strategies to Protect Against Enhancement in Zika Virus Infection. Frontiers of Immunology. 9, 597 (2018).
- Londono-Renteria, B., et al. A relevant in vitro human model for the study of Zika virus antibody-dependent enhancement. Journal of General Virology. 98 (7), 1702-1712 (2017).
- Ganger, M. T., Dietz, G. D., Ewing, S. J. A common base method for analysis of qPCR data and the application of simple blocking in qPCR experiments. BMC Bioinformatics. 18 (1), 534 (2017).
- Renn, L. A., et al. High-throughput quantitative real-time RT-PCR assay for determining expression profiles of types I and III interferon subtypes. Journal of Visualized Experiments. (97), e52650 (2015).
- McArthur, M. A., et al. Dengue vaccines: recent developments, ongoing challenges and current candidates. Expert Review of Vaccines. 12 (8), 933-953 (2013).
- Priyamvada, L., et al. Humoral cross-reactivity between Zika and dengue viruses: implications for protection and pathology. Emerging Microbes and Infections. 6 (5), 33 (2017).
- Dai, L., et al. Molecular basis of antibody-mediated neutralization and protection against flavivirus. IUBMB Life. 68 (10), 783-791 (2016).
- Dai, L., et al. Structures of the Zika Virus Envelope Protein and Its Complex with a Flavivirus Broadly Protective Antibody. Cell Host & Microbe. 19 (5), 696-704 (2016).
- Sirohi, D., et al. The 3.8 A resolution cryo-EM structure of Zika virus. Science. 352 (6284), 467-470 (2016).
- George, J., et al. Prior Exposure to Zika Virus Significantly Enhances Peak Dengue-2 Viremia in Rhesus Macaques. Scientific Reports. 7 (1), 10498 (2017).
- Morens, D. M., Halstead, S. B. Measurement of antibody-dependent infection enhancement of four dengue virus serotypes by monoclonal and polyclonal antibodies. Journal of General Virology. 71, 2909-2914 (1990).
- Dejnirattisai, W., et al. Cross-reacting antibodies enhance dengue virus infection in humans. Science. 328 (5979), 745-748 (2010).
- Priyamvada, L., et al. Human antibody responses after dengue virus infection are highly cross-reactive to Zika virus. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (28), 7852-7857 (2016).
- Charles, A. S., Christofferson, R. C. Utility of a Dengue-Derived Monoclonal Antibody to Enhance Zika Infection In Vitro. PLoS Currents. 8, (2016).
- Swanstrom, J. A., et al. Dengue Virus Envelope Dimer Epitope Monoclonal Antibodies Isolated from Dengue Patients Are Protective against Zika Virus. MBio. 7 (4), (2016).
