Estrazione ed analisi di propoli verde taiwanesi
Summary
Vi presentiamo un protocollo per l’utilizzo dell’etanolo come solvente per estrarre e caratterizzare Taiwanese propoli verde che esibisce l’attività antibatterica.
Abstract
Propoli verde taiwanese sono ricco di flavonoidi prenilato e presenta una vasta gamma di attività biologiche, come antiossidante, antibatterico e quelli anticancro. I composti bioattivi di propoli verde Taiwanese sono propolins, cioè C, D, F e G. La concentrazione di propolins in Taiwanese propoli verde varia a seconda della stagione e la posizione geografica. Pertanto, è fondamentale per stabilire una procedura standard ripetibile per la determinazione della qualità di propoli verde Taiwanese. Qui, presentiamo un protocollo che utilizza estrazione basata su etanolo, cromatografia liquida ad alte prestazioni e un’analisi di attività antibatterica per caratterizzare la qualità Taiwanese propoli verde. Questo metodo indica che le estrazioni di etanolo 95% e 99,5% raggiungere i rendimenti massima sostanza secca da Taiwanese propoli verde, producendo quindi le più alte concentrazioni di propolins che hanno proprietà antibatteriche. Secondo questi risultati, il presente protocollo è ritenuto affidabile e ripetibile per determinare la qualità di propoli verde Taiwanese.
Introduction
La propoli è una miscela resinosa naturale prodotta da specie di ape mellifera di Apis. Propoli sono stato ampiamente utilizzato sin dall’antichità in folk medicine. Uno studio recentemente riferito che propoli sono utile per prevenire le infezioni microbiche e infiammazione1. Numerosi studi hanno dimostrato che i principali composti bioattivi in propoli sono i flavonoidi, esteri di acidi fenolici, prenilato p-cumarico acidi e acidi diterpenici2,3. Fino ad oggi, sono state identificate 10 derivati di flavanone prenilato da Taiwanese propoli verde mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC)4,5,6,7. I più abbondanti fra questi sono propolins C, D, F e G5,7. Gli effetti biologici considerevoli di propoli verde Taiwanese sono correlati con il suo alto contenuto di propolins8.
Le concentrazioni di composti bioattivi in propoli variano notevolmente a seconda della stagione e la posizione geografica da cui si ricava la propoli. Propoli europeo contiene principalmente il flavonoide aglicone e fenolica acidi9. I principali composti bioattivi propoli in Brasile sono prenilato p-cumarico acidi, ad esempio artepillin C10. Uno studio ha dimostrato che la stagione è un fattore critico per la determinazione del contenuto totale propolin in Taiwanese propoli verde11. Il contenuto di propolin in Taiwanese propoli verde è più alto in estate (maggio – luglio) e la più bassa in inverno11. La proprietà antibatterica della propoli è stato ampiamente considerata un indicatore di attività biologica. Generalmente, i campioni di propoli raccolti da varie regioni hanno esibito una simile proprietà antibatteriche; ad esempio, è generalmente efficace contro quasi tutti i batteri Gram-positivi ed esibisce un limitato effetto antibatterico contro batteri gram-negativi10,12,13. Interazioni sinergiche tra i flavonoidi nella propoli sono state dimostrate per avere un effetto antibatterico14. Allo stesso modo, propoli verde Taiwanese è stato segnalato per avere un effetto antimicrobico contro batteri Gram-positivi15. Inoltre, uno studio ha inoltre identificato un effetto antimicrobico dall’interazione di propolins in Taiwanese propoli verde8.
La caratterizzazione dei composti bioattivi di propoli è difficile perché la sua composizione chimica può variare secondo la sua fonte di provenienza. Pertanto, è necessario stabilire un metodo fattibile e ripetibile per determinare la qualità della propoli verde Taiwanese. Tuttavia, nessuna procedura standard è stato stabilito per l’estrazione di propoli verde Taiwanese e successiva analisi funzionale. Sono stati proposti diversi metodi che variamente applicano solventi organici ed inorganici per propoli estrazione16,17,18,19,20. Perché la propoli è un composto lipofilico, studi hanno dimostrato che estrazione biologica è meglio di estrazione inorganici8,18,19. La concentrazione totale propolin in Taiwanese propoli verde e le sue proprietà antibatteriche sono indicatori chiave della qualità della propoli verde Taiwanese. Così, lo scopo di questo studio è di presentare un protocollo per l’utilizzo dell’etanolo come solvente per estrarre e caratterizzare le proprietà antibatteriche del Taiwanese propoli verde.
Protocol
Representative Results
Discussion
Uno studio ha riferito che la macerazione, utilizzando le varie concentrazioni di etanolo, poteva essere utilizzati per propoli brasiliano estrazione17; Tuttavia, il processo è stato molto tempo17. Ci sono voluti almeno 10 giorni per estrarre i composti bioattivi, ad esempio contenuto fenolico, dal propoli brasiliano17. In alternativa, estrazione di etanolo in combinazione con il riscaldamento a 37 ° C, 50 ° C o 70 ° C per 30 min è stato propost…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo manoscritto è stato modificato da Wallace accademico Editing.
Materials
| ethanol | Sigma-Aldrich | E7023 | |
| Whatman no. 4 filter paper | Sigma-Aldrich | WHA1004125 | |
| methanol | Sigma-Aldrich | 34860 | |
| reverse phase RP-18 column | Phenomenex Inc. | 00G-0234-E0 | |
| Staphylococcus aureus | ATCC | BCRC 10780 | |
| Escherichia coli | ATCC | BCRC 10675 | |
| tryptic soy broth | Sigma-Aldrich | 22092 | |
| nutrient broth | Sigma-Aldrich | 70122 | |
| dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| spice grinder | Waring | WSG60K | |
| microplate Reader | Molecular Devices | EMAX PLUS | |
| HPLC system | Agilent | 1200 Series | |
| vacuum evaporation | BÜCHI | Rotavapor R-215 |
References
- Zabaiou, N., et al. Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product. Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).
- Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin. Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).
- Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).
- Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis. Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).
- Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources. Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).
- Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis. Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).
- Huang, W. J., et al. Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).
- Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis. Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).
- Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis. Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).
- Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).
- Chen, Y. W., et al. Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons. Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).
- Grange, J. M., Davey, R. W. Antibacterial properties of propolis (bee glue). Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).
- Kujumgiev, A., et al. Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins. Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).
- Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus. Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).
- Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan. Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).
- Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents. Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).
- Cunha, I. B. S., et al. Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts. Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).
- Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. Extraction properties of propolis with ethanol concentration. Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).
- Park, Y. K., Ikegaki, M. Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).
- Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity. Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).
- Machado, B. A., et al. Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil. PLoS One. 11 (1), e0145954 (2016).
- Monroy, Y. M., et al. Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water. The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).
- Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan. Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).
- Chen, L. H., et al. Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet. Nutrients. 10 (4), e503 (2018).
