Summary

心血管疾病大型动物模型中心脏的解剖技术和组织学取样

Published: June 16, 2022
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Summary

由于解剖结构复杂,心脏样本的一致可重复解剖和收集方案的实施可能具有挑战性。本手稿介绍了一些标准心脏夹层方案的关键要素,重点介绍了大体检查方法和通常用于组织病理学检查的采样部位。

Abstract

标准大体检查和抽样是在大型动物中进行的心血管疾病实验研究的可重复性和成功的关键因素。考虑到心脏的复杂解剖结构、种间差异以及代偿和病理反应的类型,一致的方案很难实施。多种解剖方案的使用通常适应Prosector的经验,个人偏好仍然是实验和观察者间差异的来源。在这里,目的是介绍一些常用物种(包括狗、猪、反刍动物和猫)心脏的主要解剖特征和标志、解剖方案和组织学采样标准,作为心血管疾病的模型。

这里介绍了两种标准的粗体检查方案。首先是流入-流出法,它遵循通过心脏和大血管的生理血流方向(通常用于狗、反刍动物和猪),其次是四腔解剖技术(例如在猫身上)。在某些实验环境中,这两种技术都可以适应任何物种。采样方案包括所有感兴趣的区域(窦房结、心室、室间隔、心房、瓣膜和主动脉),如果操作得当,可提高实验研究的可重复性和可靠性。

Introduction

由于复杂的解剖结构和早期的严谨性,可能会干扰评估心壁厚度,因此心脏的大体检查具有挑战性,并且容易出现一些与技术相关或解释错误。种间形态变异以及许多临床主要心脏病(包括冠心病、纤维化、动脉炎和淀粉样变性的早期病例)与任何重大变化无关,本质上是组织学病理学。标准化的解剖和组织学样本收集方案可以带来观察者之间的一致性,同时提高心血管疾病实验研究的可比性和可重复性。

样本收集自两只狗(Canis lupus familiaris)(一只3岁的雄性法国斗牛犬和一只8岁的雌性混血犬),一只猫(Felis catus)(一只6岁的雄性欧洲短毛猫),一只家猪(Sus scrofa homeus)(一只1岁,雄性大白猫)和一头牛(Bos taurus)(一只2个月大的雌性荷斯坦犬)。每个选定的物种都有特定的用途作为不同疾病的心血管模型;例如,狗是心律失常建模的首选模型;猫是肥厚型心肌病 (HCM) 的首选,因为它是 HCM 患病率最高的物种;猪被用作急性心肌梗死的模型;反刍动物被用作中毒的模型,因为它们暴露于在草地上很容易找到的毒素11.

在本手稿中,介绍了一种心脏尸检方案和两种解剖方案,旨在改善实验性心血管疾病中心脏的大体和组织学检查。所描述的方案是根据兽医教科书1245678910、1112、期刊文献31314官方文件 15 和网络研讨会 16的信息开发的17.本研究中使用的样本是从提交给USAMV Cluj-Napoca病理部门进行常规尸检诊断的尸体中收获的。

Protocol

该实验方案获得了生物伦理协议(2022 年第 311 号),并获得了克卢日-纳波卡农业科学和兽医大学生物伦理委员会的批准,符合国家(2014 年第 43 号法律)和欧洲(2010 年第 63 号欧盟指令)立法。有关本协议中使用的所有材料和仪器的详细信息,请参阅 材料表 。 1. 尸检方案 注意:建议对提出的所有物种使用相同的尸检方案,因为…

Representative Results

该协议用于可视化解剖特征并收集样本以进行四种不同物种(狗,猫,猪和牛)的心脏组织学检查。在上述每个物种中重复尸检方案,但仅在狗中说明。尸检方案首先对身体进行广泛的外部检查(图1A)(包括皮肤、可探索的淋巴结和外部粘膜),测量整体重量,并对动物的一般状态进行评分。外部检查后,尸检继续进行,身体部分皮肤(旨在彻底检查皮下和浅表肌肉)和?…

Discussion

在执行当前协议时,应仔细考虑几个关键步骤以获得一致的结果。在幼年动物中,心脏测量值与成人不同(包括心室壁厚度),通常,心脏占体重的比例更大1112。心室肥厚的程度可以通过应用一般体重公式来量化,左心室加隔隔之间的比率除以游离右心室重量,在正常情况下,成熟动物的重量应为2.8-4.0(1)。如果该比率?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

没有。

Materials

0.9% saline solution B. BRAUN MELSUNGEN AG W04479004 For washing all the blood, and blood clots from the heart.
10% neutral buffered formalin (NBF)  Q Path 11699404 Materials for collecting histopathology samples.
Bone cutting forceps HELEN SRL LS109HV Sturdy instrument for cutting bone.
Cutting board Ambition 86304 For an easier manipulation, and cutting the organs.
Decalcifying solution Thermo Scientific TBD-2 6764004 1:1 mixture of 8% formic acid and hydrochloric acid.
Digital camera Canon Inc. PowerShot SX540 HS For photographic, and videographic documentation.
Forceps MKD-Medicale 15-430 Dissection instruments.
Histological cassettes  Q Path 720-2215 Materials for collecting histopathology samples.
Dimensions: 3 × 2.5 × 0.4 cm
Knife TEHNO FOOD COM SERV SRL D2006/15 Sharp blade for cutting soft tissue.
Latex gloves MKD-Medicale SANTEX-S Protection equipment.
Mask MKD-Medicale 21221 Protection equipment.
Petri dishes MKD-Medicale 0598-1V Materials for collecting ancillary testing samples.
Plastic recipients Corning Gosselin TP200-02 Materials for collecting histopathology samples.
Scale ESPERANZA MEEKS008 For weighing the organs.
Scale White Deals 72 For weighing the subjects.
Scalpel MKD-Medicale 10322E Sharp blade for cutting soft tissue.
Scissors MKD-Medicale 13-260 Dissection instruments.
Scrub MKD-Medicale 410100-52 Protection equipment.
Syringes MKD-Medicale 10573EU Materials for collecting ancillary testing samples.

References

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Cite This Article
Constantin, I., Tăbăran, A. F. Dissection Techniques and Histological Sampling of the Heart in Large Animal Models for Cardiovascular Diseases. J. Vis. Exp. (184), e63809, doi:10.3791/63809 (2022).

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