Tecniche di dissezione e campionamento istologico del cuore in modelli animali di grandi dimensioni per malattie cardiovascolari
Summary
A causa della complessa anatomia, un protocollo di dissezione e raccolta costantemente riproducibile per campioni cardiaci può essere difficile da implementare. Questo manoscritto presenta gli elementi chiave di alcuni protocolli standard di dissezione cardiaca, evidenziando sia gli approcci di esame grossolano che i siti di campionamento comunemente utilizzati per l’esame istopatologico.
Abstract
L’esame e il campionamento standard sono elementi chiave per la riproducibilità e il successo degli studi sperimentali sulle malattie cardiovascolari condotti su animali di grossa taglia. Considerando la complessa anatomia del cuore, le differenze interspecie e i tipi di reazioni compensative e patologiche, i protocolli coerenti sono difficili da implementare. L’utilizzo di protocolli di dissezione multipli è solitamente adattato per adattarsi all’esperienza del prosettore e le preferenze personali continuano ad essere una fonte di variabilità sperimentale e interosservatore. Qui, l’obiettivo è quello di presentare le principali caratteristiche anatomiche e punti di riferimento, i protocolli di dissezione e gli standard di campionamento istologico del cuore in alcune specie comunemente usate (tra cui cani, maiali, ruminanti e gatti) come modelli di malattie cardiovascolari.
Qui vengono presentati due protocolli standard di esame lordo. In primo luogo, il metodo di afflusso-deflusso, che segue la direzione fisiologica del flusso sanguigno attraverso il cuore e i grandi vasi (frequentemente usato in cani, ruminanti e maiali), e in secondo luogo, la tecnica di dissezione a quattro camere (esemplificata nei gatti). Entrambe le tecniche possono essere adattate a qualsiasi specie in determinate circostanze sperimentali. I protocolli di campionamento comprendono tutte le aree di interesse (nodo senoatriale, ventricoli, setto interventricolare, atri, valvole e aorta) e, se correttamente eseguiti, migliorano sia la riproducibilità che l’affidabilità degli studi sperimentali.
Introduction
A causa della complessa anatomia e del rigore precoce, che possono interferire con la valutazione dello spessore della parete cardiaca, l’esame grossolano del cuore è impegnativo e soggetto a diversi errori tecnici o di interpretazione. Ciò è amplificato dalle variazioni morfologiche interspecifiche e dal fatto che molte patologie cardiache cliniche e importanti (compresi i primi casi di malattie coronariche, fibrosi, arterite e amiloidosi) non sono associate ad alcun cambiamento grossolano, essendo, in sostanza, patologie istologiche. Un protocollo standardizzato di dissezione e prelievo istologico dei campioni può portare coerenza tra gli osservatori e, allo stesso tempo, comparabilità e riproducibilità degli studi sperimentali sulle malattie cardiovascolari.
I campioni sono stati raccolti da due cani (Canis lupus familiaris) (un Bulldog francese maschio di 3 anni e un meticcio femmina di 8 anni), un gatto (Felis catus) (un maschio europeo di 6 anni), un maiale domestico (Sus scrofa domesticus) (un maschio Large White di 1 anno) e una mucca (Bos taurus) (una femmina Holstein di 2 mesi). Ciascuna delle specie scelte ha un uso particolare come modello cardiovascolare per una diversa malattia; Ad esempio, i cani sono un modello preferito per la modellazione dell’aritmia; i gatti sono preferiti per la cardiomiopatia ipertrofica (HCM), in quanto è la specie con la più alta prevalenza di HCM; i maiali sono usati come modello per l’infarto miocardico acuto; E i ruminanti sono usati come modello per l’intossicazione a causa della loro esposizione a tossine che possono essere facilmente trovate sui prati11.
In questo manoscritto vengono presentati un protocollo necroscopico e due protocolli di dissezione del cuore, progettati per migliorare l’esame grossolano e istologico del cuore nelle malattie cardiovascolari sperimentali. I protocolli descritti sono stati sviluppati sulla base di informazioni provenienti da libri di testo veterinari 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11,12, letteratura rivista 3,13,14, documenti ufficiali 15 e webinar 16 ,17. I campioni utilizzati in questo studio sono stati raccolti da cadaveri presentati al Dipartimento di Patologia dell’USAMV Cluj-Napoca per la diagnostica autoptica di routine.
Protocol
Representative Results
Discussion
Quando si esegue il protocollo corrente, è necessario considerare attentamente diversi passaggi critici per ottenere risultati coerenti. Negli animali giovani, le misurazioni cardiache sono diverse da quelle degli adulti (compreso lo spessore della parete ventricolare) e, in generale, il cuore rappresenta una percentuale maggiore del peso corporeo11,12. Il grado di ipertrofia ventricolare può essere quantificato applicando una formula di peso generale, il rappo…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nessuno.
Materials
| 0.9% saline solution | B. BRAUN MELSUNGEN AG | W04479004 | For washing all the blood, and blood clots from the heart. |
| 10% neutral buffered formalin (NBF) | Q Path | 11699404 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Bone cutting forceps | HELEN SRL | LS109HV | Sturdy instrument for cutting bone. |
| Cutting board | Ambition | 86304 | For an easier manipulation, and cutting the organs. |
| Decalcifying solution | Thermo Scientific TBD-2 | 6764004 | 1:1 mixture of 8% formic acid and hydrochloric acid. |
| Digital camera | Canon Inc. | PowerShot SX540 HS | For photographic, and videographic documentation. |
| Forceps | MKD-Medicale | 15-430 | Dissection instruments. |
| Histological cassettes | Q Path | 720-2215 | Materials for collecting histopathology samples. Dimensions: 3 × 2.5 × 0.4 cm |
| Knife | TEHNO FOOD COM SERV SRL | D2006/15 | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Latex gloves | MKD-Medicale | SANTEX-S | Protection equipment. |
| Mask | MKD-Medicale | 21221 | Protection equipment. |
| Petri dishes | MKD-Medicale | 0598-1V | Materials for collecting ancillary testing samples. |
| Plastic recipients | Corning Gosselin | TP200-02 | Materials for collecting histopathology samples. |
| Scale | ESPERANZA | MEEKS008 | For weighing the organs. |
| Scale | White Deals | 72 | For weighing the subjects. |
| Scalpel | MKD-Medicale | 10322E | Sharp blade for cutting soft tissue. |
| Scissors | MKD-Medicale | 13-260 | Dissection instruments. |
| Scrub | MKD-Medicale | 410100-52 | Protection equipment. |
| Syringes | MKD-Medicale | 10573EU | Materials for collecting ancillary testing samples. |
References
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