Summary

فحص جدوى الترايكوديرما ستروماتيكوم كونيديا داخل الدم المحيطي البشري الضامة المشتقة أحادية النواة

Published: October 20, 2023
doi:

Summary

تستخدم التقنية التي تنطوي على البلعمة من conidia الفطرية بواسطة الضامة على نطاق واسع للدراسات التي تقيم تعديل الاستجابات المناعية ضد الفطريات. الغرض من هذه المخطوطة هو تقديم طريقة لتقييم البلعمة وقدرات إزالة البلاعم المشتقة من الدم المحيطي البشري أحادية النواة المحفزة باستخدام Trichoderma stromaticum conidia.

Abstract

تمثل البلاعم خط دفاع حاسم وهي مسؤولة عن منع نمو واستعمار مسببات الأمراض في الأنسجة المختلفة. البلعمة المخروطية هي عملية رئيسية تسمح بالتحقيق في الأحداث السيتوبلازمية والجزيئية التي تنطوي عليها تفاعلات البلاعم الممرضة ، وكذلك لتحديد وقت وفاة الكونيديا الداخلية. تستخدم التقنية التي تنطوي على البلعمة من conidia الفطرية بواسطة الضامة على نطاق واسع للدراسات التي تقيم تعديل الاستجابات المناعية ضد الفطريات. التهرب من البلعمة والهروب من البلعمة هي آليات الفوعة الفطرية. هنا ، نبلغ عن الطرق التي يمكن استخدامها لتحليل البلعمة ، وإزالة ، وصلاحية T. stromaticum conidia ، وهي الفطريات التي تستخدم كعامل مكافحة حيوية وسماد حيوي وقادرة على إحداث العدوى البشرية. يتكون البروتوكول من 1) ثقافة الترايكوديرما ، 2) الغسيل للحصول على كونيديا ، 3) عزل خلايا الدم أحادية النواة المحيطية (PBMCs) باستخدام طريقة محلول polysucrose وتمايز PBMCs إلى بلاعم ، 4) طريقة البلعمة في المختبر باستخدام أغطية زجاجية مستديرة وتلوينها ، و 5) مقايسة إزالة لتقييم صلاحية الكونيديا بعد البلعمة الكونيديا. باختصار ، يمكن استخدام هذه التقنيات لقياس كفاءة إزالة الفطريات للبلاعم.

Introduction

يتكون جنس الترايكوديرما (الرتبة: Hypocreales ، العائلة: Hypocreaceae) من الفطريات الرمية في كل مكان وهي طفيليات من الأنواع الفطرية الأخرى وقادرة على إنتاج مجموعة من الإنزيمات المفيدة تجاريا1. تستخدم هذه الأنواع الفطرية لإنتاج البروتينات غير المتجانسة2 ، وإنتاج السليلوز3 ، والإيثانول ، والبيرة ، والنبيذ ، والورق4 ، في صناعة النسيج5 ، وصناعة الأغذية6 ، وفي الزراعة كعوامل مكافحة بيولوجية 7,8. بالإضافة إلى الاهتمام الصناعي بهذه الأنواع الفطرية ، فإن العدد المتزايد من الإصابات في البشر قد أعطى بعض أنواع الترايكوديرما حالة مسببات الأمراض الانتهازية9.

Trichoderma spp. تنمو بسرعة في الثقافة ، مع مستعمرات بيضاء وقطنية في البداية تتحول إلى الأصفر المخضر إلى الأخضرالداكن 10. يتم تكييفها للعيش في مجموعة واسعة من ظروف الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة ، والأنواع الانتهازية قادرة على البقاء على قيد الحياة في درجة الحموضة الفسيولوجية ودرجات الحرارة ، وبالتالي ، استعمار الأنسجة البشرية المختلفة11،12،13. الأهم من ذلك ، أن ارتفاع معدل الإصابة ب Trichoderma spp. قد يترافق مع عوامل الفوعة ، وهذه لم تدرس جيدا. بالإضافة إلى ذلك ، لا تزال الدراسات التي تركز على فهم الاستجابة المناعية ضد أنواع الترايكوديرما الانتهازية نادرة.

أثناء العدوى ، إلى جانب العدلات ، تمثل البلاعم خط الدفاع المسؤول عن البلعمة ، وبالتالي تمنع نمو واستعمار مسببات الأمراض في الأنسجة المختلفة. باستخدام مستقبلات التعرف على الأنماط ، مثل المستقبلات الشبيهة ب Toll ومستقبلات الليكتين من النوع C ، تقوم البلاعم بالفطريات البلعمية ومعالجتها في جسيمات البلعمة ، وبالتالي تعزيز انفجار الجهاز التنفسي ، وإطلاق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، وتدمير الكائنات الحية الدقيقة البلعمية14. ومع ذلك ، يمكن أن تتأثر آلية البلعمة وتتهرب منها الاستراتيجيات الميكروبية المختلفة ، مثل حجم وشكل الخلايا الفطرية. وجود كبسولات تعيق البلعمة. تقليل عدد المستقبلات التي تحفز البلعمة ؛ إعادة تشكيل بنية ألياف الأكتين في السيتوبلازم ؛ إعاقة تشكيل الكاذب. وهروب البلعمة أو البلعمة بعد عملية البلعمة14.

تستخدم العديد من مسببات الأمراض ، بما في ذلك Cryptococcus neoformans ، الضامة كمكان مناسب للبقاء على قيد الحياة في المضيف ، ونشر العدوى وتحريضها15. يستخدم اختبار البلعمة والإزالة لتقييم الاستجابة المناعية ضد مسببات الأمراض وتحديد الاستراتيجيات الميكروبية المستخدمة للتهرب من جهاز المناعة الفطري15،16،17. يمكن أيضا استخدام هذا النوع من التقنية لفحص الحركية التفاضلية للبلعمة ، وتحمض البلعمة المتأخر ، والانفجار التأكسدي الذي يؤدي إلى تقليل قتل الفطريات18.

يمكن استخدام طرق مختلفة لتقييم البلعمة، وبقاء الفطريات، والتهرب من عملية نضوج الجسيمات. وتشمل هذه المجهر الفلوري ، والذي يستخدم لمراقبة البلعمة ، والموقع الخلوي ، والجزيئات المنتجة أثناء البلعمة19. قياس التدفق الخلوي ، الذي يوفر بيانات كمية عن البلعمة ويستخدم لتقييم العلامات المختلفة المشاركة في العملية20,21 ؛ الفحص المجهري داخل الجسم ، والذي يستخدم لتقييم التقاط الميكروبات ونضج البلعمة22 ؛ البلعمة بوساطة الأجسام المضادة ، والتي تستخدم لتقييم خصوصية عملية البلعمة لمسببات الأمراض23 ؛ وغيرها24،25،26،27.

يستخدم البروتوكول المقدم هنا طريقة شائعة ومنخفضة التكلفة ومباشرة باستخدام المجهر الضوئي ومقايسة نمو الصفائح لتقييم البلعمة وقتل الكونيديا الفطرية. سيوفر هذا البروتوكول للقراء تعليمات خطوة بخطوة لإجراء فحص البلعمة والإزالة باستخدام الضامة المشتقة من الدم البشري أحادي النواة المعرضة ل T. stromaticum. تم استخدام PBMCs لأن Trichoderma conidia يتم تطبيقه كمكافحة حيوية ضد مسببات الأمراض النباتية والأسمدة الحيوية للمحاصيل النباتية في جميع أنحاء العالم وتسبب في العديد من الإصابات البشرية ، والتي تسمى داء المشعرات. إلى جانب ذلك ، لا يوجد سوى عملين سابقين يركزان على التفاعل بين Trichoderma conidia وجهاز المناعة البشري ، حيث قمنا بفحص العدلات28 والالتهام الذاتي في الضامة29. توضح هذه المقالة أولا كيف يمكن دراسة البلعمة في كونيديا T. stromaticum بواسطة البلاعم المشتقة من PBMC ، ثم كيف يمكن تقييم صلاحية الكونيديا المبتلعة باستخدام تقنيات بسيطة قائمة على الفحص المجهري. قد يسهل هذا البروتوكول بشكل أكبر التحقيقات في الاستجابة المناعية المرتبطة بالبلاعم أو الآليات المتعلقة بتعديل الجهاز المناعي.

Protocol

الاعتبارات الأخلاقية والموضوعات البشريةأجريت جميع التجارب على البشر الموصوفة في هذه الدراسة وفقا لإعلان هلسنكي والقوانين الفيدرالية البرازيلية ووافقت عليها لجنة الأخلاقيات بجامعة ولاية سانتا كروز (رمز تعريف المشروع: 550.382 / 2014). تم جمع الدم المحيطي البشري من مت?…

Representative Results

تستخدم التقنية التي تنطوي على البلعمة من conidia الفطرية بواسطة الضامة على نطاق واسع للدراسات التي تقيم تعديل الاستجابات المناعية ضد الفطريات. استخدمنا البلعمة من T. stromaticum conidia لتقييم صلاحية الكونيديا بعد البلعمة ، لأن التهرب من البلعمة وهروب البلعمة هي آليات الفوعة الفطرية. يجب على الب…

Discussion

بالنسبة للعديد من مسببات الأمراض الفطرية بما في ذلك Aspergillus fumigatus و Cryptococcus و Candida albicans وغيرها ، فإن البلعمة المخروطية أو الخميرة هي عملية رئيسية تسمح بالتحقيق في الأحداث السيتوبلازمية والجزيئية في تفاعلات البلاعم الممرضة ، وكذلك لتحديد وقت وفاة الكونيديا الداخلية14…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسات التمويل البرازيلية التالية: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB) بمنح RED0011/2012 و RED008/2014. تعترف U.R.S. ، J.O.C. ، و M.E.S.M. بالمنحة الدراسية الممنوحة من Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) و FAPESB ، على التوالي.

Materials

15 mL centrifuge tubes Corning CLS431470 15 mL centrifuge tubes, polypropylene, conical bottom with lid, individually sterile
24-Well Flat Bottom Cell Culture Plate Kasvi K12-024 Made of polystyrene with alphanumeric identification; The Cell Culture Plate is DNase, RNase and pyrogen-free and free of cytotoxic substances; Sterilized by gamma radiation;
Cell culture CO2 incubator Sanyo 303082 A CO2 incubator serves to create and control conditions similar to a human body, thus allowing the in vitro growth and proliferation of different cell types.
Centrifuge Microtube (eppendorf type) 1.5 mL Capp 5101500 Made from polypropylene, with a cap attached to the tube for opening and closing with just one hand. It has a polished interior against protein adhesion and for sample visibility, being free of DNase, RNase and Pyrogens
Circular coverslip 15 mm Olen K5-0015 Circular coverslips are used for microscopy techniques in cell culture. Made of super transparent translucent glass; with thickness of 0.13 mm
Class II Type B2 (Total Exhaust) Biosafety Cabinets Esco Lifesciences group 2010274 Airstream Class II Type B2 Biosafety Cabinets (AB2) provide product, operator and environmental protection and are suitable for work with trace amounts of toxic chemicals and agents assigned to biological safety levels I, II or III. In a Class II Type B2 cabinet, all inflow and downflow air is exhausted after HEPA/ULPA filtration to the external environment without recirculation across the work surface.
Dextrose Potato Agar medium Merck 145 Potato Dextrose Agar is used in the cultivation and enumeration of yeasts and fungi
EDTA vacuum blood collection tube FirstLab FL5-1109L EDTA is the recommended anticoagulant for hematology routines as it is the best anticoagulant for preserving cell morphology.
Entellan Merck 1.07961  Fixative agent; Entellan is a waterless mounting medium for permanent mounting for microscopy.
Fetal Bovine Serum Gibco A2720801 Fetal bovine serum (FBS) is a universal growth supplement of cell and tissue culture media. FBS is a natural cocktail of most of the factors required for cell attachment, growth, and proliferation, effective for most types of human and animal (including insect) cells.
Flaticon  database of images
Glycerol Merck 24900988 The cryoprotectant agent glycerol is used for freezing cells and spores
Histopaque-1077 polysucrose solution
Image J  Image analysis software
Microscopy slides Precision 7105 Slide for Microscopy 26 x 76 mm Matte Lapped Thickness 1.0 to 1.2 mm. Made of special optical glass and packaged with silk paper divider with high quality transparency free of imperfections
Mini centrifuge Prism C1801 The Prism Mini Centrifuge was designed to be extremely compact with an exceptionally small footprint. Includes 2 interchangeable quick-release rotors that spin up to 6000 rpm. An electronic brake provides quick deceleration and the self-opening lid allows easy access to the sample, reducing handling time.
Neubauer chamber Kasvi K5-0011 The Neubauer Counting Chamber is used for counting cells or other suspended particles.
Panoptic fast  Laborclin 620529 Laborclin's  panoptic fast c is a kit for quick staining in hematology
Penicillin/Streptomycin Solution – 10,000U LGC- Biotechnology  BR3011001 antibiotic is used in order to avoid possible contamination by manipulation external to the laminar flow.
Petri dish 90 x 15 mm Smooth Cralplast 18248 Disposable Petri dish; Made of highly transparent polystyrene (PS); flat bottom; Smooth;Size: 90 x 15 mm.
Phosphate buffered saline (PBS) thermo fisher Scientific 10010001 PBS is a water-based saline solution with a simple formulation. It is isotonic and non-toxic to most cells. It includes sodium chloride and phosphate buffer and is formulated to prevent osmotic shock while maintaining the water balance of living cells.
Pipette Pasteur 3 mL Sterile Accumax AP-3-B-S STERILE ACCUMAX PASTEUR 3 ML PIPETTE with 3 mL capacity, made of transparent low-density polyethylene (LDPE) and individually sterile
Refrigerated Centrifuge Thermo Scientific TS-HM16R The Thermo Scientific Heraeus Megafuge 16R Refrigerated Centrifuge is a refrigerated centrifuge with the user-friendly control panel makes it easy to pre-set the speed, RCF value, running time, temperature, and running profile. The Megafuge 16R can reach maximum speeds of 15,200 RPM and maximum RCF of 25,830 x g.
RPMI-1640 Medium Merck MFCD00217820 HEPES Modification, with L-glutamine and 25 mM HEPES, without sodium bicarbonate, powder, suitable for cell culture
The single channel micropipettes Eppendorf Z683809 Single-channel micropipettes are used to accurately transfer and measure very small amounts of liquids.
Tip for Micropipettor Corning 4894 Capacity of 10 µL and 1,000 µL Autoclavable
Triocular inverted microscope LABOMED VU-7125500 It allows you to observe cells inside tubes and bottles, without having to open them, thus avoiding contamination problems.

References

  1. Samuels, G. J. Trichoderma: A review of biology and systematics of the genus. Mycological Research. 100 (8), 923-935 (1996).
  2. Nevalainen, H., Peterson, R., Gupta, V. K., Schmoll, M., Herrera-Estrella, A., Upadhyay, R. S., Druzhinina, I., Tuohy, M. G. Chapter 7 – Heterologous expression of proteins in Trichoderma. Biotechnology and Biology of Trichoderma. , (2014).
  3. Do Vale, L. H. F., Filho, E. X. F., Miller, R. N. G., Ricart, C. A. O., de Sousa, M. V., Gupta, V. K., Schmoll, M., Herrera-Estrella, A., Upadhyay, R. S., Druzhinina, I., Tuohy, M. G. Chapter 16 – Cellulase systems in Trichoderma: An overview. Biotechnology and Biology of Trichoderma. , (2014).
  4. Ferreira, N. L., Margeot, A., Blanquet, S., Berrin, J. G., Gupta, V. K., Schmoll, M., Herrera-Estrella, A., Upadhyay, R. S., Druzhinina, I., Tuohy, M. G. Chapter 17 – Use of cellulases from Trichoderma reesei in the twenty-first century part I: Current industrial uses and future applications in the production of second ethanol generation. Biotechnology and Biology of Trichoderma. , (2014).
  5. Puranen, T., Alapuranen, M., Vehmaanperä, J., Gupta, V. K., Schmoll, M., Herrera-Estrella, A., Upadhyay, R. S., Druzhinina, I., Tuohy, M. G. Chapter 26 – Trichoderma enzymes for textile industries. Biotechnology and Biology of Trichoderma. , (2014).
  6. Kunamneni, A., Plou, F. J., Alcalde, M., Ballesteros, A., Gupta, V. K., Schmoll, M., Herrera-Estrella, A., Upadhyay, R. S., Druzhinina, I., Tuohy, M. G. Chapter 24 – Trichoderma enzymes for food industries. Biotechnology and Biology of Trichoderma. , (2014).
  7. Mukherjee, P. K., Horwitz, B. A., Herrera-Estrella, A., Schmoll, M., Kenerley, C. M. Trichoderma research in the genome era. Annual Review of Phytopathology. 51 (1), 105-129 (2013).
  8. Mukherjee, M., et al. Trichoderma-plant-pathogen interactions: Advances in genetics of biological control. Indian Journal of Microbiology. 52 (4), 522-529 (2012).
  9. dos Santos, U. R., dos Santos, J. L. Trichoderma after crossing kingdoms: Infections in human populations. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part B. 26 (2), 97-126 (2023).
  10. Asis, A., et al. Identification patterns of Trichoderma strains using morphological characteristics, phylogenetic analyses and lignocellulolytic activities. Molecular Biology Reports. 48 (4), 3285-3301 (2021).
  11. Antal, Z., et al. Comparative study of potential virulence factors in human pathogenic and saprophytic Trichoderma longibrachiatum strains. Acta Microbiologica et Immunologica Hungarica. 52 (3-4), 341-350 (2005).
  12. Hatvani, L., Manczinger, L., Vágvölgyi, C., Kredics, L., Mukherjee, P. K., Horwitz, B. A., Singh, U. S., Mukherjee, M., Schmoll, M. Trichoderma as a human pathogen. Trichoderma: Biology and Applications. , (2013).
  13. Kredics, L., et al. Clinical importance of the genus Trichoderma: A review. Acta Microbiologica et Immunologica Hungarica. 50 (2-3), 105-117 (2003).
  14. Erwig, L. P., Gow, N. A. R. Interactions of fungal pathogens with phagocytes. Nature Reviews Microbiology. 14 (3), 163-176 (2016).
  15. Nicola, A. M., Casadevall, A. In vitro measurement of phagocytosis and killing of Cryptococcus neoformans by macrophages. Methods in Molecular Biology. 844, 189-197 (2012).
  16. Medina, E., Goldmann, O. In vivo and ex vivo protocols for measuring the killing of extracellular pathogens by macrophages. Current Protocols in Immunology. , 1-17 (2011).
  17. Drevets, D. A., Canono, B. P., Campbell, P. A. Measurement of bacterial ingestion and killing by macrophages. Current Protocols in Immunology. 109, 1-17 (2015).
  18. Gresnigt, M. S., et al. Differential kinetics of Aspergillus nidulans and Aspergillus fumigatus phagocytosis. Journal of Innate Immunity. 10 (2), 145-160 (2018).
  19. Steinberg, B. E., Grinstein, S. Analysis of macrophage phagocytosis: Quantitative assays of phagosome formation and maturation using high-throughput fluorescence microscopy. Methods in Molecular Biology. 531, 45-56 (2009).
  20. Yan, Q., Ahn, S. H., Fowler, V. G. Macrophage phagocytosis assay of Staphylococcus aureus by flow cytometry. Bio-Protocol. 5 (4), 1406 (2015).
  21. Marr, K. A., Koudadoust, M., Black, M. Early events in macrophage killing of Aspergillus fumigatus conidia New flow cytometric viability assay. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 8 (6), 1240-1247 (2001).
  22. Surewaard, B. G. J., Kubes, P. Measurement of bacterial capture and phagosome maturation of Kupffer cells by intravital microscopy. Methods. 128, 12-19 (2017).
  23. Siggins, M. K., et al. Differential timing of antibody-mediated phagocytosis and cell-free killing of invasive African Salmonella allows immune evasion. European Journal of Immunology. 44 (4), 1093-1098 (2014).
  24. Cannon, G. J., Swanson, J. A. The macrophage capacity for phagocytosis. Journal of Cell Science. 101 (4), 907-913 (1992).
  25. Harvath, L., Terle, D. A. Assay for phagocytosis. Methods in Molecular Biology. 115, 281-290 (1999).
  26. dos Santos, A. G., et al. Trichoderma asperelloides spores downregulate dectin1/2 and TLR2 receptors of mice macrophages and decrease Candida parapsilosis phagocytosis independent of the M1/M2 polarization. Frontiers in Microbiology. 8, 1681 (2017).
  27. Souza, J. A. M., et al. Characterization of Aspergillus fumigatus extracellular vesicles and their effects on macrophages and neutrophils functions. Frontiers in Microbiology. 10, 2008 (2019).
  28. Oliveira-Mendonça, L. S., et al. Inhibition of extracellular traps by spores of Trichoderma stromaticum on neutrophils obtained from human peripheral blood. Molecular Immunology. 141, 43-52 (2022).
  29. Oliveira-Mendonça, L. S., et al. Trichoderma stromaticum spores induce autophagy and downregulate inflammatory mediators in human peripheral blood-derived macrophages. Current Research in Microbial Sciences. 3, 100145 (2022).
  30. Johnston, L., Harding, S. A., La Flamme, A. C. Comparing methods for ex vivo characterization of human monocyte phenotypes and in vitro responses. Immunobiology. 220 (12), 1305-1310 (2015).
  31. Abedon, S. T., Bartom, E., Maloy, S., Hughes, K. Multiplicity of infection. Brenner’s Encyclopedia of Genetics. Second Edition. , (2013).
  32. Rios, F. J., Touyz, R. M., Montezano, A. C. Isolation and differentiation of human macrophages. Methods in Molecular Biology. 1527, 311-320 (2017).
  33. Lombard, Y., Giaimis, J., Makaya-Kumba, M., Fonteneau, P., Poindron, P. A new method for studying the binding and ingestion of zymosan particles by macrophages. Journal of Immunological Methods. 174 (1-2), 155-165 (1994).
  34. Ghoneum, M., Gollapudi, S. Phagocytosis of Candida albicans by metastatic and non metastatic human breast cancer cell lines in vitro. Cancer Detection and Prevention. 28 (1), 17-26 (2004).
  35. Nunes, J. P. S., Dias, A. A. M. ImageJ macros for the user-friendly analysis of soft-agar and wound-healing assays. BioTechniques. 62 (4), 175-179 (2017).
  36. Alves-Filho, E. R., et al. The biocontrol fungus Trichoderma stromaticum downregulates respiratory burst and nitric oxide in phagocytes and IFN-gamma and IL-10. Journal of Toxicology and Environmental Health – Part A: Current Issues. 74 (14), 943-958 (2011).
  37. Slesiona, S., et al. Persistence versus escape: Aspergillus terreus and Aspergillus fumigatus employ different strategies during interactions with macrophages. PLoS One. 7 (2), 31223 (2012).
  38. Johnston, S. A., May, R. C. Cryptococcus interactions with macrophages: Evasion and manipulation of the phagosome by a fungal pathogen. Cellular Microbiology. 15 (3), 403-411 (2013).
  39. Alonso, M. F., et al. The nature of the fungal cargo induces significantly different temporal programmes of macrophage phagocytosis. The Cell Surface. 8, 100082 (2022).
  40. Brakhage, A. A., Bruns, S., Thywissen, A., Zipfel, P. F., Behnsen, J. Interaction of phagocytes with filamentous fungi. Current Opinion in Microbiology. 13 (4), 409-415 (2010).
  41. Dos Santos, U. R., et al. Exposition to biological control agent Trichoderma stromaticum increases the development of cancer in mice injected with murine melanoma. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 10, 252 (2020).
  42. Wang, G., et al. Exopolysaccharide from Trichoderma pseudokoningii induces macrophage activation. Carbohydrate Polymers. 149, 112-120 (2016).
  43. Xu, Y., et al. Exopolysaccharide from Trichoderma pseudokoningii promotes maturation of murine dendritic cells. International Journal of Biological Macromolecules. 92, 1155-1161 (2016).
  44. Schmoll, M., Esquivel-Naranjo, E. U., Herrera-Estrella, A. Trichoderma in the light of day – Physiology and development. Fungal Genetics and Biology. 47 (11), 909-916 (2010).
  45. Zhang, G., Li, D. Trichoderma longibrachiatum-associated skin inflammation and atypical hyperplasia in mouse. Frontiers in Medicine. 9, 865722 (2022).
  46. Paredes, K., Capilla, J., Mayayo, E., Guarro, J. Virulence and experimental treatment of Trichoderma longibrachiatum, a fungus refractory to treatment. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 60 (8), 5029-5032 (2016).
  47. Perkhofer, S., Speth, C., Dierich, M. P., Lass-Flörl, C. In vitro determination of phagocytosis and intracellular killing of Aspergillus species by mononuclear phagocytes. Mycopathologia. 163 (6), 303-307 (2007).

Play Video

Cite This Article
dos Santos, U. R., de Castro, J. O., Santos Matos, M. E., De Bonis, G., dos Santos, J. L. Viability Assay of Trichoderma stromaticum Conidia Inside Human Peripheral Blood Mononuclear-Derived Macrophages. J. Vis. Exp. (200), e65231, doi:10.3791/65231 (2023).

View Video