نموذج الفئران لفشل القلب الناجم عن فرط شحميات الدم مع الكسر القذفي المحفوظ

Summary

يقدم هذا البروتوكول نهجا مفصلا لتكرار نموذج الفئران لفشل القلب الناجم عن فرط شحميات الدم مع الكسر القذفي المحفوظ (HFpEF). يجمع التصميم بين إدارة مستقبلات البروتين الدهني منخفض الكثافة 9-troponin T-heart المرتبط بالفيروس الغدي (AAV9-cTnT-LDLR) و poloxamer-407 (P-407).

Abstract

الفيزيولوجيا المرضية لفشل القلب مع الكسر القذفي المحفوظ (HFpEF) المدفوع بالسمية الدهنية غير مفهومة بشكل كامل. نظرا للحاجة الملحة لنماذج حيوانية تحاكي بدقة HFpEF الأيضي للقلب ، تم تطوير نموذج الفئران الناجم عن فرط شحميات الدم من خلال الأنماط الظاهرية للهندسة العكسية التي شوهدت في مرضى HFpEF. يهدف هذا النموذج إلى التحقيق في HFpEF ، مع التركيز على التفاعل بين السمية الدهنية ومتلازمة التمثيل الغذائي. تم تحفيز فرط شحميات الدم في الفئران من النوع البري (WT) على خلفية سلالة 129J من خلال الحقن داخل الصفاق كل أسبوعين من poloxamer-407 (P-407) ، وهو بوليمر مشترك كتلة يمنع ليباز البروتين الدهني ، جنبا إلى جنب مع حقنة واحدة في الوريد من الفيروس المرتبط بالغدي 9-القلب تروبونين T- مستقبلات البروتين الدهني منخفض الكثافة (AAV9-cTnT-LDLR). تم إجراء تقييمات مكثفة بين 4 و 8 أسابيع بعد العلاج ، بما في ذلك تخطيط صدى القلب ، وتسجيل ضغط الدم ، وتخطيط التحجم لكامل الجسم ، وقياس صدى القلب (ECG) عن بعد ، ومراقبة عجلة النشاط (AWM) ، والتحليلات الكيميائية الحيوية والنسيجية. أظهرت الفئران LDLR / P-407 سمات مميزة في أربعة أسابيع ، بما في ذلك الخلل الانبساطي ، والحفاظ على جزء القذف ، وزيادة سمك جدار البطين الأيسر. والجدير بالذكر أن ضغط الدم ووظائف الكلى ظلت ضمن النطاقات الطبيعية. بالإضافة إلى ذلك ، كشف ECG و AWM عن كتل القلب وانخفاض النشاط ، على التوالي. تدهورت الوظيفة الانبساطية في ثمانية أسابيع ، مصحوبة بانخفاض كبير في معدلات التنفس. كشف مزيد من التحقيق في نموذج العلاج المزدوج عن ارتفاع التليف ونسب الرئة الرطبة / الجافة ونسب وزن القلب / وزن الجسم. أظهرت الفئران LDLR / P-407 زانثلازما ، استسقاء ، ونقص تروية القلب. ومن المثير للاهتمام أن الوفيات المفاجئة حدثت بين 6 و 12 أسبوعا بعد العلاج. يوفر نموذج الفئران HFpEF موردا تجريبيا قيما وواعدا لتوضيح تعقيدات متلازمة التمثيل الغذائي التي تساهم في الخلل الانبساطي في سياق HFpEF بوساطة السمية الدهنية.

Introduction

يشير قصور القلب مع الكسر القذفي المحفوظ (HFpEF) إلى متلازمة قلبية أيضية مصحوبة بأمراض مصاحبة متعددة ويشكل أكثر من 50٪ من جميع حالات قصور القلب ^1,2. علاوة على ذلك ، ارتفع تواتر HFpEF بشكل مطرد خلال العقد الماضي³. مع خيارات العلاج المحدودة ، يمثل HFpEF أهم ضرورة طبية غير ملباة في أمراض القلب والأوعية الدموية ، نظرا للفيزيولوجيا المرضية متعددة الأوجه⁴. وبالتالي ، توجد حاجة ملحة لتعزيز فهم الآليات الأساسية والفيزيولوجيا المرضية ل HFpEF لتطوير علاجات فعالة.

على الرغم من التطورات الكبيرة في السنوات الأخيرة ، لا تزال الفيزيولوجيا المرضية ل HFpEF المنسوبة إلى السمية الدهنية غير مفهومة بشكل كامل. ثبت أن المرضى الذين يعانون من HFpEF يظهرون تراكما ملحوظا لدهون عضلة القلب مقارنة بأولئك الذين يعانون من قصور القلب مع انخفاض الكسر القذفي (HFrEF) والضوابط الصحية⁵. أظهرت بيانات تسلسل الحمض النووي الريبي من خزعات القلب انخفاضا في تنظيم جين ليباز البروتين الدهني (LPL) في مجموعة HFpEF مقارنة بالمرضى الأصحاء ومرضى HFrEF⁶. Poloxamer-407 (P-407) عبارة عن بوليمر مشترك يحفز فرط شحميات الدم عن طريق منع LPL وبالتالي زيادة الدهون الثلاثية في البلازما وكوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL)⁷. أظهرت الدراسات السابقة ارتفاع تعبير مستقبلات LDL (LDLR) في قلوب الفئران HFpEF⁸.

بناء على هذه النتائج والاعتراف بالحاجة الملحة لنماذج حيوانية تحاكي بدقة HFpEF الاستقلابي للقلب ، تم تطوير نموذج الفئران الناجم عن فرط شحميات الدم وتقديمه. تم تصميم هذا النموذج لاستكشاف HFpEF ، مع التركيز بشكل صريح على تورط السمية الدهنية جنبا إلى جنب مع متلازمة التمثيل الغذائي. تم إنشاء هذا النموذج الناجم عن حصار فرط شحميات الدم / LPL وتعزيز تعبير LDLR القلبي ، في الفئران WT-129 على خلفية 129J من خلال الحقن داخل الصفاق (i.p) كل أسبوعين من P-407 جنبا إلى جنب مع حقنة وريدية واحدة (IV) من الفيروس المرتبط بالغدي 9-تروبونين القلب T-LDLR (AAV9-cTnT-LDLR) ⁹.

بين 4 و 8 أسابيع بعد العلاج ، تم إجراء مجموعة واسعة من التقييمات ، بما في ذلك تخطيط صدى القلب ، وتسجيلات ضغط الدم ، وتخطيط التحجم لكامل الجسم (WBP) ، والقياس عن بعد لتخطيط القلب الكهربائي المستمر (ECG) ، ومراقبة عجلة النشاط (AWM) ، بالإضافة إلى التحليلات الكيميائية الحيوية والنسيجية⁹. في أربعة أسابيع ، أظهرت الفئران LDLR / P407 أو “العلاج المزدوج” ميزات HFpEF مميزة ، بما في ذلك الخلل الانبساطي ، والكسر القذفي المحفوظ ، وزيادة سمك جدار البطين الأيسر⁹. بالإضافة إلى ذلك ، كشف القياس عن بعد ECG و AWM عن كتل القلب وانخفاض النشاط ، على التوالي. والجدير بالذكر أن ضغط الدم ووظائف الكلى ظلت طبيعية⁹. بحلول ثمانية أسابيع ، تدهورت الوظيفة الانبساطية ، وكشفت قياسات WBP النقاب عن انخفاض معدلات التنفس⁹.

كشف مزيد من الاستكشاف لنموذج العلاج المزدوج عن التليف ، وارتفاع نسب الرئة الرطبة / الجافة ، ونسب وزن القلب / وزن الجسم⁹. كشف التشريح عن الاستسقاء ونقص تروية القلب والزانثلازما. ومن المثير للاهتمام ، تم توثيق الوفيات المفاجئة بين 6 و 12 أسبوعا بعد العلاج⁹. يوفر نموذج HFpEF الذي يحركه فرط شحميات الدم في الفئران أداة تجريبية سريعة وقيمة وواعدة لكشف تعقيدات متلازمة التمثيل الغذائي التي تساهم في الخلل الانبساطي مع HFpEF بوساطة السمية الشحمية.

Protocol

تمت الموافقة على بروتوكول من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام (IACUC) في جامعة ميامي ، بما يتوافق مع إرشادات المعهد الوطني للصحة (NIH) (بروتوكول IACUC 23-103-ad03). بالنسبة للدراسة الحالية ، تم الحصول على الفئران من النوع البري (WT) على خلفية 129J من مصدر تجاري (انظر جدول المواد) وتم تربيتها داخليا. كانت جميع الفئران من القمامة على خلفية 129J. شملت التجارب كلا من ذكور وإناث الفئران. تم إنشاء فأر LDLR / P-407 HFpEF من خلال إعطاء جرعة واحدة من AAV9-cTnT-LDLR في الأسبوع الأول و p407 كل أسبوعين لمدة أربعة أسابيع. 1. AAV9-cTnT-LDLR إعداد وإدارة ملاحظة: البلازميد AAV9-cTNT-hLDLR (انظر جدول المواد) يشفر بروتين LDLR البشري الكامل (2664bp) (الشكل 1). إعداد الناقل الفيروسي AAV-LDLRبناء على عدد ، قم بإذابة قوارير مخزون AAV9 على الجليد لمدة 20 دقيقة ، ثم قم بتخفيف جزيئات AAV في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (DPBS) من Dulbecco للحصول على تركيز 1 × 1012 جينومات متجه / فأر في 100 ميكرولتر. ضع المحلول الفيروسي في إبرة 28-30 جم على حقنة سعة 1 مل. احرص على تجنب سحب فقاعات الهواء في الإبرة. إجراءات حقن الوريد الذيل (IV)قم بتشغيل الأكسجين حتى 0.5 لتر / دقيقة واضبط نظام التخدير إيزوفلوران على 4٪ -5٪. ضع الماوس في غرفة الحث لمدة ~ 2 دقيقة ، حتى لا يستجيب. ضع على مقيد إضاءة ذيل الفأر (على سبيل المثال ، Braintree Scientific، Inc. (Braintree ، MA)) واستوعب المستلقي على جانبه. استخدم تخدير الأيزوفلوران بنسبة 2٪ -3٪ للصيانة.ملاحظة: سيؤدي التسخين بواسطة جهاز التقييد إلى تمدد وريد ذيل الفئران ، وبالتالي يسهل الحقن بشكل ملحوظ. تحديد الوريد الذيل الجانبي. نظف منطقة الحقن بمطهر باستخدام وسادة شاش. امسك نهاية الذيل لتمديده ، وقم بتدليك ذيل الماوس بالأصابع حتى يتم تصور الوريد. أدخل الإبرة بزاوية منخفضة (زاوية 10-15 درجة) وحقن 100 ميكرولتر من AAV المخفف في وريد الذيل (الشكل 2 أ). اسحب الإبرة واضغط على الفور بإصبعك حتى يتوقف النزيف. أعد الماوس إلى القفص الأصلي. 2. P-407 الإعداد والإدارة إعداد P-407قم بإعداد المحلول عن طريق تخفيف عامل P-407 (انظر جدول المواد) باستخدام DPBS إلى تركيز نهائي قدره 100 مجم / مل داخل غطاء دخان. قم بتبريد المحلول عند 4 درجات مئوية طوال الليل على دوار لتسهيل إذابة P-40710. إجراء الحقن داخل الصفاق (IP) كل أسبوعينوزن كل فأر في اليوم الأول من حقن i.p. باستخدام الصيغة 1 جم / كجم ، احسب الجرعة المناسبة لكل فأر وفقا للأوزان والمحاقن المملوءة مسبقا. تحت غطاء الدخان ، قم بتقييد الماوس يدويا مع إمالة الرأس والجسم لأسفل من أجل إعادة وضع الأعضاء الداخلية في الجمجمة. هذه التقنية تتجنب ثقب الهياكل الحيوية في المنطقة المجاورة. تحديد التجويف البريتوني الأيسر في الربع السفلي من البطن ، الجانبي إلى خط الوسط. نظف الموقع بمطهر. بزاوية 45 درجة أو أقل ، أدخل الإبرة في التجويف البريتوني (الشكل 2 ب). نضح المحقنة لضمان الإدخال الكافي. إذا كان الدم أو الأنسجة موجودة عند الشفط ، اسحب الإبرة وكرر الخطوات 2.2.2 -2.2.4 حتى تصبح المحقنة صافية. تخلص من الإبرة في حاوية الأدوات الحادة المناسبة وأعد الماوس إلى القفص الأصلي. 3. تقييم تخطيط صدى القلب اعدادضع كريم مزيل الشعر على صدر الفأر وأعلى بطنه في اليوم السابق أو قبل عدة ساعات من التصوير. إزالة كريم مع الشاش الرطب بعد 2 دقيقة. تخدير الماوس مع 2.5٪ -3.0٪ إيزوفلوران بمعدل تدفق 0.8 لتر / دقيقة والحفاظ على 1٪ -1.5٪ إيزوفلوران. بعد ذلك ، قم بتأمين الماوس إلى المنصة المناسبة في وضع ضعيف مع الكفوف على منصات القطب الكهربائي مع هلام التوصيل وتغطية الأنف والفم بمخروط الأنف لضمان التخدير المستمر باستخدام الأيزوفلوران. عرض المحور الطويل شبه القصيمع وضع الماوس بشكل مستقيل ، قم بإمالة الجانب الأيمن من المنصة 45 درجة. بعد ذلك ، قم بمحاذاة مسبار محول الطاقة قطريا في نظام السكك الحديدية ، وقم بتحريكه 30-40 درجة في اتجاه عقارب الساعة من الطرف العلوي الأيمن إلى البطن الأيسر للحصول على صور الوضع B وتخزينها. قم بتحليل صور الوضع B باستخدام برنامج تحليل الموجات فوق الصوتية (انظر جدول المواد) للحصول على الكسر القذفي (الشكل 3 أ). عرض المحور القصير شبه القصيقم بتدوير مسبار محول الطاقة في نظام السكك الحديدية 90 درجة في اتجاه عقارب الساعة للحصول على صور الوضع B والوضع M وتخزينها. عرض قميقم بإمالة الزاوية العلوية اليسرى من المنصة لأسفل ونحو اليمين. توجيه محول نحو الكتف الأيمن للحيوان. تصور الصمام التاجي في الوضع B ووضع دوبلر الملون. الحصول على وتخزين الموجات النبضية (PW) دوبلر والأنسجة دوبلرالصور 5. قم بتحليل صور PW Doppler و DNA Doppler باستخدام برنامج تحليل الموجات فوق الصوتية للحصول على IVRT و E / E و E / A (الشكل 3B-E). 4. تسجيل بيانات حلقة حجم الضغط (PV) إجراء تحليلات الدورة الدموية في ختام الدراسة لتقييم وظيفة البطين الأيسر (LV) الانقباضي والانبساطي ، باتباع الإجراء الموصوف سابقا11،12.ابدأ بتحفيز الماوس باستخدام الأيزوفلوران (3-5٪ ، غرفة الحث). عندما يبدأ عمل التخدير ، نقل إلى مقاعد البدلاء الجراحية ، والحفاظ على التخدير مع isoflurane (1-3 ٪ ، قناع الوجه). قم بعمل شق صغير في الجلد فوق الرقبة للسماح بالتنبيب الرغامي (عن طريق الفم). تهوية بمزيج من الأكسجين والأيزوفلوران باستخدام جهاز تهوية للقوارض (على سبيل المثال ، Micro vent model 848 ، جهاز هارفارد) تم ضبطه على حجم ~ 0.15-0.2 مل ومعدل التنفس عند 120-170 نفسا / دقيقة. مراقبة درجة حرارة الجسم عند ~ 37 °C ± 1 °C طوال العملية باستخدام طاولة جراحية يتم التحكم في درجة حرارتها. كشف وتقنية الوريد الوداجي الداخلي الأيسر بإبرة 30 جم لإدارة دعم السوائل. قطع الجلد فوق موقع الرقبة البطنية المتوسطة وكشف الشريان السباتي. بعد انسداد الجزء البعيد من الشريان السباتي الأيمن ، قم بعمل قطع صغير في الشريان للسماح بإدخال قسطرة ذات حجم ضغط دقيق (PV) (انظر جدول المواد) في البطين الأيسر (نهج الصدر المغلق). سجل الحلقات الكهروضوئية أثناء الحالة المستقرة وانسداد الوريد الأجوف السفلي. في نهاية التجربة ، القتل الرحيم للحيوان بشكل إنساني (تحت التخدير العميق) باستخدام طريقة AVMA المعتمدة (على سبيل المثال ، Isoflurane متبوعا بخلع عنق الرحم). تحليل البيانات الكهروضوئية باستخدام برنامج LabChart (انظر جدول المواد) ، ومعايرة الأحجام باستخدام قياسات تخطيط صدى القلب.

Representative Results

بعد 4 أسابيع من الجرعة المفردة المركبة ، i.v. AAV9-cTnT-LDLR ونصف أسبوعي. كشفت حقن P-407 ، تخطيط صدى القلب عن HFpEF ، كما يتضح من الكسر القذفي المحفوظ ، ووقت الاسترخاء المطول داخل البطيني (IVRT) و E / E ‘بالإضافة إلى انخفاض E / A (الشكل 3A-E). لوحظ ضعف انبساطي أسوأ بعد 8 أسابيع بالمقارنة مع البيانات بعد 4 أسابيع. أظهر تحليل حلقة حجم الضغط (PV) بعد 8 أسابيع من العلاج زيادة منحدر العلاقة بين الضغط والحجم الانبساطي ، مما يؤكد نتائج تخطيط صدى القلب للخلل الانبساطي (الشكل 3F). والجدير بالذكر أن الموت المفاجئ حدث في عدد كبير من الفئران التي عولجت ب LDLR / P-407 بين 6 و 12 أسبوعا بعد العلاج باستخدام LDLR / P-407 (الشكل 3G). تشير هذه النتائج إلى HFpEF للقلب والتمثيل الغذائي ، مما يؤكد فعالية هذا البروتوكول والتصميم التجريبي. لوحظ فرط شحميات الدم في الفئران التي عولجت ب LDLR / P407 في 4 و 8 أسابيع ، كما يتضح من ارتفاع الكوليسترول الكلي ، والدهون الثلاثية ، والبروتين الدهني منخفض الكثافة (VLDL) ، وكوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL) ، ومستويات كوليسترول البروتين الدهني عالية الكثافة الطبيعية ، مما يؤكد النتائج التي توصلنا إليها من فرط شحميات الدم (الشكل 3H). الشكل 1: خريطة البلازميد ل AAV9-cTnT-LDLR. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل. الشكل 2: إجراءات الحقن. (أ) صورة تمثيلية توضح حقن الوريد الذيل (IV) ل AAV9-cTnT-LDLR في ماوس WT على خلفية سلالة 129J. (ب) رسم توضيحي للحقن داخل الصفاق ل P-407 في فأر WT على خلفية سلالة 129J التي سبق معالجتها بجرعة IV واحدة من AAV9-cTnT-LDLR. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. الشكل 3: HFpEF الاستقلابي للقلب. (A-E) معلمات تخطيط صدى القلب التي تشير إلى قصور القلب مع الكسر القذفي المحفوظ (HFpEF) بعد 4 (ن = 17) و 8 أسابيع (ن = 11) من علاج LDLR / P-407 مقارنة بالفئران غير المعالجة (ن = 15). يتضح هذا من خلال الكسر القذفي المحفوظ ، ووقت الاسترخاء المطول (IVRT) ، وزيادة E / E ‘وانخفاض E / A ، وجميع مؤشرات الخلل الانبساطي. (F) كشف اكتساب حلقة الضغط والحجم والتحليلات عن زيادة منحدر علاقة الضغط والحجم الانبساطي النهائي (EDPVR) بعد 8 أسابيع من العلاج. (ز) حدثت الوفاة المفاجئة بين 6 و 12 أسبوعا بعد العلاج باستخدام LDLR / P-407. (H) دعمت لوحة الدهون نتائج فرط شحميات الدم في الفئران المعالجة ب LDLR / P407 في 4 (ن = 4) و 8 أسابيع (ن = 3) كما يتضح من ارتفاع الكوليسترول الكلي ، والدهون الثلاثية ، والبروتين الدهني منخفض الكثافة (VLDL) ، وكوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL) ، ومستويات كوليسترول البروتين الدهني عالية الكثافة الطبيعية مقارنة بالفئران غير المعالجة (ن = 5). يتم تمثيل البيانات كمتوسط ± SD. * P < 0.05 ، ** P < 0.01 ، ***P < 0.001 ، **** P < 0.0001. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Discussion

على الرغم من الزيادة المطردة في انتشار HFpEF على مدى العقد الماضي ، لا يزال الفهم الملموس للفيزيولوجيا المرضية الأساسية بعيد المنال¹³. علاوة على ذلك ، اعتبارا من اليوم ، يوجد علاج محدود قائم على الأدلة¹³. من الضروري تحسين فهم الآليات المشاركة في HFpEF القلبي الأيضي. في السابق ، تم تقديم نموذج فأر فرط شحميات الدم الذي يحاكي HFpEF مع عدم وجود مرض الكلى المزمن (CKD) ولا ارتفاع ضغط الدم الناجم عن LDLR OE القلبي وحقن p407⁹.

كشفت النتائج أن الجمع بين LDLR OE القلبي وفرط شحميات الدم يؤدي إلى خلل وظيفي انبساطي ، وعدم انتظام ضربات القلب ، وتضخم البطين الأيسر (LV) ، وعدم تحمل التمارين الرياضية ، وتراكم الدهون في القلب ، والتليف في الفئران بعد أربعة أسابيع ، كما نشر سابقا⁹. كما لوحظت زيادة في امتصاص الكوليسترول الضار في القلوب والكبد والعضلات الهيكلية وانخفاض الدهون الثلاثية في قلوب وكبد هذه الفئران⁹. تكمن ميزة هذه الطريقة في سرعتها للتحقيق في مسارات متلازمة القلب والأوعية الدموية ، والتي ليست مفهومة جيدا مقارنة بنماذج الفئران HFpEF فرط شحميات الدم الأخرى ، مثل النظام الغذائي عالي الدهون (HFD) الذي يتطلب ما يصل إلى 16 و 20 أسبوعا لتطوير¹⁴. يستغرق هذا النموذج أربعة أسابيع لتطوير ويحاكي التشوهات الأيضية لدى البشر. لذلك ، فإن استنساخ هذا النموذج أمر ضروري.

لا بد من ضمان الإعداد والإدارة الشاملين ل AAV9-cTnT-LDLR و P-407. تعتمد قابلية تكرار هذا النموذج بشكل كبير على الحسابات الدقيقة لتركيزات وجرعات P-407 و AAV9-cTnT- LDLR ، بالإضافة إلى قياسات الوزن. نفس القدر من الأهمية هي الاستعدادات الحل وتقنيات الحقن في الوريد وداخل الصفاق المناسبة. قد تؤدي الانحرافات في هذه التقنيات إلى تغييرات كبيرة ونتائج غير مرغوب فيها.

على الرغم من فعالية وكفاءة هذا النموذج ، توجد العديد من القيود. هناك حاجة إلى تدريب صارم لأداء الحقن في الوريد وداخل الصفاق. بالإضافة إلى ذلك ، هناك خطر محتمل من المراضة والوفيات المرتبطة بالحقن الوريدي والمتكرر داخل الصفاق. قد تنتج إصابات ذيل الفأر عند إجراء الحقن في الوريد ، في حين قد يحدث ثقب cecal مع الحقن داخل الصفاق ، مما يؤدي إلى التهاب الصفاق¹⁵. عادة ما تكون هذه الإصابات بسبب تقنيات غير صحيحة وقد تؤدي إلى فقدان الموضوعات التجريبية والعلاج. لذلك ، من الضروري إجراء تدريب مكثف قبل تنفيذ هذه الإجراءات. قيد آخر هو تركيز هذا النموذج على سلالة 129J. ينبع الأساس المنطقي وراء اختيار سلالة 129J من الدراسات الأولية التي أسفرت عن خلل وظيفي انبساطي أسرع ونتائج HFpEF في هذه السلالة مقارنة بالفئران C57BL / 6 التي درسناها في البداية في تحقيقات غير منشورة.

بغض النظر عن هذه القيود ، سيسمح هذا النموذج بإجراء تحقيقات أسرع في الآليات الأساسية التي ينطوي عليها HFpEF وخيارات العلاج الفعالة المحتملة. أدت الدراسات السابقة إلى تطوير نموذج فسيولوجي مرضي ل HFPEF الناجم عن القلب والأوعية الدموية HFpEF الناجم عن HFD و N[w]-nitro-l-arginine methyl ester (L-NAME) على مدى 5-15^{أسبوعا 13}. ومع ذلك ، نظرا للزيادة المطردة في انتشار HFpEF ، هناك حاجة ملحة لمزيد من الفهم للفيزيولوجيا المرضية ل HFpEF القلبي وتطوير علاج فعال. هذا النموذج الفئران من القلب LDLR OE وفرط شحميات الدم الناجم عن p407 هو وسيلة سريعة ومجدية لتحفيز HFpEF القلبية الأيضية للمساعي البحثية المستقبلية.

Materials

Adeno-associated virus 9-cardiac troponin T-LDLR (AAV9-cTnT-LDLR)	U. Penn Vector Core, funded by the NHLBI Gene Therapy Program (GTRP)		Transgene plasmids and AAVs particles were generated by the U. Penn Vector Core, funded by the NHLBI Gene Therapy Program (GTRP). AAV were provided in Dulbecco’s phosphate-buffered saline (PBS) with 0.001% Pluronic F68. The Core determined AAV titers by digital droplet polymerase chain reaction (ddPCR) and assessed all preparations for capsid protein ratio by SDS-PAGE and for the presence of endotoxin. Constructs include the human (h) transcripts tagged by 3X HA, Penn Vector Core (RRID: SCR_022432). AAV9-cTNT-hLDLR plasmid encodes the full human LDLR protein (2664bp).
Imaging systems with a high frequency transducer probe MS400	(VisualSonics, Toronto, ON, Canada)	Vevo 2100 or 3100
Isoflurane	Akorn Animal Health, Inc.	NDC: 59399-106-01
LabChart  software	ADInstruments	Pro version 8.1.5
Poloxamer 407	Sigma-Aldrich	16758
PV catheter	Millar Instrument	PVR 1035
Ultrasound analysis software	Vevo Lab
Wild-type (WT) mice on 129J background	Jackson Laboratory