マウス卵黄嚢とAGMから早期の造血幹細胞の分離

Summary

このビデオでは、胚から卵黄嚢と大動脈 – 生殖腺 – 中腎領域をマイクロ細かく分析し、造血幹細胞をソートするには、フローサイトメトリーを使用する方法を示します。

Abstract

マウス胚では、初期の造血は卵黄嚢と大動脈性腺中腎領域を含む複数の臓器に同時に発生します。これらの領域は、胚の血液系の確立に極めて重要であり、胎児の肝臓及びその後bonemarrowにおける成体幹細胞の開発に幹細胞の最終的な動きにつながる。初期の造血幹細胞はこれらの器官から、より純粋な集団を得るために、フローサイトメトリー選別が続く胚の顕微解剖によって単離することができる。これらの幹細胞集団は、胎児および成体幹細胞のプールに貢献する方法、それは不明なままである。また、私たちの研究室では、初期の幹細胞が機能的に胎児と成人の造血幹細胞からどのように異なるか調査する。さらに、私たちの研究室をソート造血幹細胞の異なる集団と遺伝的モデルのさまざまな文脈でそれらの機能的役割をテストします。コロニーアッセイと骨髄移植：このビデオでは、我々は我々が一般的に使用し、また、これらの貴重な個体群を隔離typical FACSのplotfterの結果を示す顕微解剖の手順を紹介する、それが含む機能的アッセイのさまざまな実行することが可能です。

Protocol

マウス卵黄嚢と大動脈 – 生殖腺 – 中腎領域からの初期の造血幹細胞の解離と分離開始する前に、手続に必要なすべての試薬とツールを持つことが重要です。 はさみ鉗子、サイズ4、および外科グレードの曲がった先端鉗子、サイズ5 / 45（オプション） シリンジと30ゲージの針 35mmと100ミリメートルペトリ皿 10％、20％ウシ胎児血清を含むPBS そ…