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Mapeamento simultâneo e quantificação de ribonucleotídeos no DNA mitocondrial humano
JoVE 杂志
生物学
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JoVE 杂志 生物学
Simultaneous Mapping and Quantitation of Ribonucleotides in Human Mitochondrial DNA

Mapeamento simultâneo e quantificação de ribonucleotídeos no DNA mitocondrial humano

DOI:
10.3791/56551-v

•

12:35 min

•

November 14, 2017

•

, ,
1Department for Medical Biochemistry and Cell Biology,University of Gothenburg, 2Department of Biology and Biological Engineering,Chalmers University of Technology

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:55HincII Treatment and Alkaline Hydrolysis
  • 04:115′-End Phosphorylation
  • 05:21Single Strand DNA Ligation
  • 06:35Second Strand Synthesis
  • 08:23PCR Amplification, Library Analysis and Pooling
  • 10:10Results: Simultaneous Quantitation and Genome-wide Mapping of Ribonucleotides
  • 11:39Conclusion

Summary

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Aqui nós descrevemos um método passível de dosar simultaneamente e ribonucleotídeos mapa de todo o genoma em DNA altamente intacta na resolução de single-nucleotide, combinando a clivagem enzimática do DNA genômico com sua hidrólise alcalina e subsequente 5´-final sequenciamento.

Tags

Mitochondrial DNARibonucleotidesDNA IntegrityDNA ReplicationDNA RepairHeLa CellsHincIIParamagnetic Beads70% EthanolPotassium HydroxidePotassium ChlorideSodium Acetate

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