归巢的骨髓造血细胞
Summary
本文介绍了用于研究对他们龛的造血干细胞归巢于骨髓的协议。
Abstract
寻的是现象，使移植的造血干细胞是能够前往和嫁接，或建立在骨髓居住。各种chemomkines和受体参与造血干细胞归巢。 [1，2]
本文概述了经典的寻的协议，用于造血干细胞的研究。在一般情况下，这种分离的细胞群的寻的需求进行调查，人口与利益的染料染色和收件人的动物的血液流注入这些细胞。收件人的动物，然后牺牲在一个预先确定的时间，注射后和骨髓的细胞，这些细胞染料的利益积极的百分比或绝对数量评估。在最常见的实验计划，从两个不同的动物基因造血干细胞（野生型动物和相应的基因敲除）的归巢效率是相比。本文介绍了归巢的造血干细胞作为实验的框架协议。
Protocol
我们开始提取在实验中使用的细胞归巢的实验。对于这个目前的实验中，我们感兴趣的是找出如果收件人动物长骨龛的全骨髓寻的是不同的从野生型动物，如C57BL/6J（WT）中提取的骨髓细胞和那些转基因为溶血磷脂受体1（LPAR1）（KO）击倒。 在我们开始实验之前，我们将收集的材料，我们这个实验的需要。所有的鼠标在我们的实验室进行解剖是在层流组织培养罩，尤其是当细胞将被移植到收件人的动物?…
Discussion
寻的是过程中，骨髓细胞，包括干细胞，祖细胞分化的细胞，他们被注射进入血液流或小鼠骨髓腔后，进入骨髓。由于从定义是明显的，科学家可能选择研究造血干细胞，祖细胞分化的细胞或确定的免疫表型和细胞分选分离的归巢。通常科学家贫宗族标记注入骨髓细胞和祖细胞和干细胞丰富。
利益注入细胞的剂量是在这个实验中的变量。细胞的数量可以改变每个收件人鼠标?…
Acknowledgements
这个协议进行了测试，并在实验室博士大卫Scadden进行了优化。 Dana Farber癌症研究所/麻省总医院临床血液学和肿瘤学奖学金计划提供资金。
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Mediatech, Inc | 21-031-CV | ||
| Sterile Fetal Bovine Serum | Valley Biomedical, Inc | BS3033 | ||
| 0.5M EDTA (pH 8.0) | Boston BioProducts | BM-150 | ||
| Tryphan Blue solution | Mediatech, Inc | 25-900-CI | ||
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | ||
| Isopropranolol U.S.P. | Denison Pharmaceuticals, Inc | |||
| Vybrant DiD cell-labelling solution | Invitrogen | V22887 | ||
| Vybrant DiI cell-labelling solution | Invitrogen | V22885 |
Referenzen
- Adams, G. B., et al. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor. Nature. 439 (7076), 599-603 (2006).
- Broxmeyer, H. E. Chemokines in hematopoiesis. Curr Opin Hematol. 15 (1), 49-58 (2008).
Diesen Artikel zitieren
Yusuf, R. Z., Scadden, D. T. Homing of Hematopoietic Cells to the Bone Marrow. J. Vis. Exp. (25), e1104, doi:10.3791/1104 (2009).