Sturen van hematopoietische cellen naar het beenmerg
Summary
Dit artikel beschrijft een protocol dat wordt gebruikt om de homing van hematopoietische cellen om hun niches studie in het beenmerg.
Abstract
Homing is het fenomeen waarbij getransplanteerde hematopoietische cellen zijn in staat om te reizen naar en inenten of verblijf in het beenmerg vast te stellen. Verschillende chemomkines en receptoren betrokken zijn bij de homing van hematopoietische stamcellen. [1, 2]
Dit document schetst de klassieke homing protocol dat wordt gebruikt in hematopoietische stamcellen studies. In het algemeen gaat het om het isoleren van de celpopulatie die homing dient te worden onderzocht, vlekken deze populatie met een kleurstof van belang en het injecteren van deze cellen in de bloedbaan van een ontvanger dier. De ontvanger dier wordt dan opgeofferd op een vooraf bepaalde tijd na de injectie en het beenmerg geëvalueerd voor het percentage of absolute aantal cellen die positief zijn voor de kleurstof van belang. In een van de meest voorkomende experimentele regelingen, het homing efficiëntie van hematopoietische cellen van twee genetisch verschillende dieren (een wild-type dier en de bijbehorende knock-out) wordt vergeleken. Dit artikel beschrijft de hematopoietische cellen homing-protocol in het kader van, zoals experiment.
Protocol
Discussion
Homing is het proces waarbij beenmergcellen waaronder stamcellen, progenitor cellen en gedifferentieerde cellen, hun weg naar het beenmerg na injectie in de bloedbaan of het beenmerg holte van muizen. Zoals blijkt uit de definitie, kan een wetenschapper ervoor gekozen om de homing van hematopoietische stamcellen, progenitorcellen of gedifferentieerde cellen geïdentificeerd door immunofenotypering en geïsoleerd door celsortering te bestuderen. Typisch wetenschappers injecteren beenmergcellen uitgeput voor lineage marke…
Acknowledgements
Dit protocol werd getest en geoptimaliseerd in het laboratorium van Dr David Scadden. De financiering wordt verstrekt door het Dana Farber Cancer Institute / Massachusetts General Hospital Klinische hematologie en oncologie Fellowship Program.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Mediatech, Inc | 21-031-CV | ||
| Sterile Fetal Bovine Serum | Valley Biomedical, Inc | BS3033 | ||
| 0.5M EDTA (pH 8.0) | Boston BioProducts | BM-150 | ||
| Tryphan Blue solution | Mediatech, Inc | 25-900-CI | ||
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | ||
| Isopropranolol U.S.P. | Denison Pharmaceuticals, Inc | |||
| Vybrant DiD cell-labelling solution | Invitrogen | V22887 | ||
| Vybrant DiI cell-labelling solution | Invitrogen | V22885 |
Referenzen
- Adams, G. B., et al. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor. Nature. 439 (7076), 599-603 (2006).
- Broxmeyer, H. E. Chemokines in hematopoiesis. Curr Opin Hematol. 15 (1), 49-58 (2008).
