الكروموسومات التحضير انتشار الخلايا الجذعية الجنينية البشرية لKaryotyping
Summary
Karyotyping هي تقنية بسيطة ومفيدة تستخدم على نطاق واسع للكشف عن تغيرات جينية. نحن هنا وصف خطوة خطوة لإعداد بروتوكول نشر كروموسوم من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية لرصد حالة الكروموسومات من هذه الخلايا في الحفاظ على الثقافة.
Abstract
وإن كانت قد أظهرت الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) لتقديم النمط النووي ضعفاني مستقرة 1 ، وأفادت دراسات عديدة بأن تبعا للظروف الثقافة التي تصبح عرضة لاكتساب شذوذ الكروموسومات مثل إضافة أو أجزاء كاملة من الكروموزومات. في الواقع ، خلال فترة طويلة الأجل والثقافة ، ولوحظت تغييرات karyotypic عندما تستخدم الأنزيمية أو التفكك الكيميائي 2،3،4 ، في حين تشريح دليل المستعمرات الركض ليحتفظ النمط النووي مستقرة 5. الى جانب ذلك ، التغيرات في البيئة ، مثل ازالة الخلايا المغذية ويبدو أيضا أن تعرض للخطر سلامة الجيني للhESC 3،6. مرة واحدة يمكن أن تؤثر التغيرات الكروموسومية الفيزيولوجيا الخلوية ، وتوصيف سلامة الجيني للhESC في المختبر أمر حاسم hESC النظر بوصفه أداة أساسية في الدراسات والاختبارات تخلق المخدرات. علاوة على ذلك ، لأغراض علاجية في المستقبل التغيرات الكروموسومية هي مصدر قلق حقيقي ويرتبط في كثير من الأحيان إلى التسرطن.
هنا نعرض طريقة بسيطة ومفيدة للحصول على ارتفاع هوامش كروموسوم الجودة للتحليل اللاحق للكروموسوم التي وضعتها مجموعة النطاقات ، SKY ، FISH أو تقنيات CGH 7،8. نوصي بالتحقق من الوضع الكروموسومات بشكل روتيني مع فترات من 5 فقرات من أجل رصد ظهور translocations و[أنيوبلويدي]
ساهم Priscila بريتو وSartore رافاييلا بالتساوي على الورق.
Protocol
Discussion
إعداد ينتشر الكروموسومات هي خطوة حاسمة لإجراء تحليل لحالة نجاح الوراثية للخلايا الجذعية الجنينية من خلال تقنيات روتينية كما G – النطاقات ، وتقنيات أكثر تطورا مثل الأسماك والسماء وCGH.
ويمكن تطبيق هذا الإجراء لأنواع مختلفة العديد ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 15 ml centrifuge tube | TPP | 91015 | ||
| Colcemid Karyo MAX | Gibco | 15212-012 | ||
| EDTA | Isofar | 721 | ||
| Glacial acetic acid | Isofar | 100 | ||
| Methanol | Isofar | 208 | ||
| Potassium Chloride (KCl) | Merck | 104.931.000 | ||
| Slide | Bioslide | 7105-1 | ||
| Tripsin | SIGMA | T4799 |
Referenzen
- Thomson, J. A. Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts. Science. 282 (5391), 1145-1145 (1998).
- Draper, J. S. Recurrent gain of chromosomes 17q and 12 in cultured human embryonic stem cells. Nat Biotechnol. 22 (1), 53-53 (2004).
- Maitra, A. Genomic alterations in cultured human embryonic stem cells. Nat Genet. 37 (10), 1099-1099 (2005).
- Mitalipova, M. M. Preserving the genetic integrity of human embryonic stem cells. Nat Biotechnol. 23 (1), 19-19 (2005).
- Buzzard, J. J., Gough, N. M., Crook, J. M., Colman, A. Karyotype of human ES cells during extended culture. Nat Biotechnol. 22 (4), 381-381 (2004).
- Caisander, G. Chromosomal integrity maintained in five human embryonic stem cell lines after prolonged in vitro culture. Chromosome Res. 14 (2), 131-131 (2006).
- Imreh, M. P. In vitro culture conditions favoring selection of chromosomal abnormalities in human ES cells. J Cell Biochem. 99 (2), 508-508 (2006).
- Robin-Wesselschmidt, J. L., Loring, J. F., Robin-Wesselschmidt, J. L., Robin-Wesselschmidt, S. c. h. w. a. r. t. z. . Human Stem Cell Manual. , 59-59 (2007).
- Rooney, D. E. . Human Cytogenetics. , (2001).
- Heslop-Harrison, P., Schwarzacher, T., Heslop-Harrison, P., Schwarzacher, T. . Practical in situ hybridization. , 51-51 (2000).
