FITC-Dextran Feeding: een methode om intestinale permeabiliteit te kwantificeren bij C. elegans

Abstract

Bron: Le, T. A. N., et al. Het meten van de effecten van bacteriën en chemicaliën op de darmpermeabiliteit van Caenorhabditis elegans. J.Vis. Exp. (2019). 

Deze video introduceert een methode om de integriteit van het C. elegans darmlumen te visualiseren en te meten door wormen fitc-gelabelde dextran te voeren.  Het voorbeeldprotocol toont de test die is uitgevoerd met 3,3′-diindolylmethane (DIM)-behandelde en door ziekteverwekkers gevoede wormen.

Protocol

Dit protocol is een uittreksel uit Le et al, Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp. (2019). Voorbereiding van NGM-platen voor het testen van de effecten van een chemische stof (DIM) o…

Representative Results

Figuur 1: Het effect van DIM op de darmpermeabiliteit van C. elegans gevoed P. aeruginosa. Microscopiebeelden van wormen van (A) E. coli OP50 zonder FITC-dextran voeding, (B) E. coli met FITC-dextran voeding, (C) P. aeruginosa PAO1 met FITC…

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N