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Medizin

Pseudofracture : 급성 주변 조직 외상 모델

Published: April 18, 2011
doi:
10.3791/2074
, , , , ,
1Department of Surgery,University of Pittsburgh, 2Department of Orthopedic Surgery,University of Aachen Medical Center

Summary

Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델은, 늦은 용어 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. 이 문서는 여러 외상의 연구를 허용하는 실험 모델 조합의 가능성을 포함하여 단계 모델 단계의 절차 실행을 설명합니다.

Abstract

외상 다음 여러 장기의 장애와 외상 환자에서 높은 사망률을 초래할 수있는 초기 하이퍼 반응 염증 반응이있다,이 반응은 종종 감염의 임상적 합병증을 추가 지연 immunosuppression 동반되며 사망률을 높일 수 있습니다 1-9가. 많은 연구 외상 다음 면역 체계의 반응에서 이러한 변화를 평가하기 시작했습니다. 10-15도
Immunologic 연구는 크게 유전자 변형 및 생체내 모델링에 사용할 수 녹아웃 마우스의 다양한 통해 지원되며. 자세한 조사에서 이러한 변종이 원조는 immunologic 응답에 관련된 분자 경로를 평가할 16-21

마우스의 파괴 고정 기술이 복잡하고 쉽게 재현할 수는 없습니다로서 실험 murine 외상 모델링에 도전, 장기 조사입니다. 22-30

마취의 지속, 장기간 사용하지 않고 동물과 장기 생존에 이동의 자유를 허용하면서이 pseudofracture 모델, 쉽게 복제 외상 모델은, immunologically 끝단 파괴 환경을 흉내낸하여 이러한 어려움을 극복. 목적은 긴 골절의 기능을 재현하는 것입니다, 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되어 있습니다.

hindlimbs에 양자 근육 호감 부상이 부상을 근육으로 뼈를 솔루션의 주입에 의해 다음 : pseudofracture 모델은 두 부분으로 구성되어 있습니다. 본 솔루션은 연령과 체중 일치 syngeneic 기증자 모두 hindlimbs에서 긴 뼈가 수확하여 준비가되어 있습니다. 이 유골은 다음 조각과 인산염의 resuspended하는 것은 뼈 솔루션을 만들 수 살린 버퍼.

양자 대퇴골 골절은 끝단 외상의 일반적으로 사용하고 잘 구축 모델이며, pseudofracture 모델의 개발 기간 동안 비교 모델. 우리가 멸균 아직 비례 심한 말초 조직 외상 모델을 원하는 사용 가능한 파괴 모델의 다양한 가운데, 우리는 pseudofracture 우리의 비교와 같은 부드러운 조직 손상과 파괴의 폐쇄 방법을 사용하기로 결정했습니다. 31

출혈성 쇼크가 심각한 외상의 설정에서 일반적인 발견이며, 세계 hypoperfusion는 외상 모델에 매우 관련된 요소를 추가합니다. 32-36 pseudofracture 모델이 쉽게 높은 심각도의 여러 외상 모델 출혈성 쇼크 모델과 결합 수 있습니다 . 37

Protocol

1. 악기, 외과 필드 준비 : 모든 실험 절차는 무균 기술을 사용하여 수행됩니다. 시작하기 전에 실험 지역은 철저하게 청소하고 소독해야합니다. benchtop은 공기 건조 후 70 % 알코올로 닦여 수, 소독해야합니다. 실험 작업 영역에 드레싱 수술 블루 패드 및 살균 필드를 배치합니다. 모든 자료와 악기 압력솥 사용하기 전에 소독을하고 있습니다. 주사기와 바?…

Discussion

Pseudofracture, 무균 musculoskeletal 외상의 재현성 murine 모델, 외상후 면역 반응의 평가를 위해 수 있습니다. pseudofracture 모델 immunologically 긴 골절의 기능의 레크 리에이션을 통해 끝단 파괴 환경을 모방 : 부상 근육과 부드러운 조직은 원래 뼈 한방울 흘리지 않고 손상된 뼈 및 골수에 노출되는 38,39 biphasic 면역 반응은 다음과 같은 볼 수 있습니다. 48hrs 주변 여물로 묘사 지연 immunosuppression의 두 ?…

Offenlegungen

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

출혈성 쇼크 GM053789의 기금 소스 / 번호 분자 생물학

Materials

Material Name Typ Company Catalogue Number Comment
Surgical blue pad   Fisher Scientific 50-7105  
Sterile Field dressings   Fisher Scientific NC9517505  
Circulating heating pad 18″x26″   Harvard py872-5272  
Hot bead instrument sterilizer   VWR 11156-002  
Stainless steel tray 8″ x 11″   VWR 62687-049  
Plexiglass boards (10x15x0.5cm)   University of Pittsburgh Machine shop    
Tape rolls 1″   Corporate Express MMM26001  
50cc conical tube   can be purchased through any global vendor    
Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone)   VWR 159000-058  
Oster A5 clippers w. size 40 blade   VWR 10749-020  
Surgical scissors (straight – 12cm)   Fine Science Tools 14068-12  
Hemostats curved -18cm   Harvard 81331718  
Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm)   Fine Science Tools 11050-10  
Gauze 4″x4″   can be purchased through any global vendor    
1.5cc microfuge tube   can be purchased through any global vendor    
Ice bucket   can be purchased through any global vendor    
Mortar and Pestle   Fisher 12-961AA  
1cc syringe w/ 25G needle   Fisher Scientific 14-826-88  
20G needle   can be purchased through any global vendor    
1mL pipetteman   can be purchased through any global vendor    
1mL pipette tips   can be purchased through any global vendor    
Falcon polystyrene 8ml tubes   VWR 60819-331  
Sterilization pouch 3″x8″   VWR 24008  
Sterilization pouch 5″x10″   VWR 24010  
MacConkey II Agar plate   BD Biosciences 221172  
Ethyl Alcohol – 200 proof   Pharmaco-AAPER   [70%]
Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution)   Ovation   70mg/kg
Aerrane (Isoflurane)   Baxter   99.9%
Triadine Povidone Iodine (Betadine)   Triad disposables    
Phosphate Buffered Saline (PBS)        
Buprenorphine HCl   Bedford Laboratories   0.1mg/kg
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Referenzen

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PseudofractureHyper-reactive Inflammatory ResponseMultiple Organ DysfunctionHigh MortalityDelayed ImmunosuppressionClinical ComplicationsInfectionMortalityImmunologic StudiesTransgenic MiceKnockout MiceIn Vivo ModelingMolecular PathwaysFracture Fixation TechniquesPseudofracture ModelExtremity Fracture EnvironmentDamaged Bone And Bone Marrow
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Darwiche, S. S., Kobbe, P., Pfeifer, R., Kohut, L., Pape, H., Billiar, T. Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model. J. Vis. Exp. (50), e2074, doi:10.3791/2074 (2011).
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