Pseudofracture: Un Modelo periférica aguda trauma tisular
Summary
Pseudofracture, un modelo reproducible murino de trauma musculoesquelético estéril, permite la evaluación de finales de término post-traumático respuestas inmunes. En este artículo se describe el procedimiento de ejecución de la etapa de modelo a paso, incluyendo el potencial de las combinaciones de modelos experimentales para permitir el estudio de un politraumatismo.
Abstract
Después de un trauma es una de las primeras hiper-reactiva respuesta inflamatoria que puede conducir a la disfunción de múltiples órganos y la alta mortalidad en pacientes con traumatismos, esta respuesta es a menudo acompañado por una inmunosupresión retraso que se suma a las complicaciones clínicas de la infección y también puede aumentar la mortalidad 1-9. Muchos estudios han comenzado a evaluar los cambios en la reactividad del sistema inmune después de un trauma. 10-15
Estudios inmunológicos son un gran apoyo a través de la amplia variedad de transgénicos y ratones knock-out disponible en modelos in vivo;. Cepas de estas ayudas en la investigación detallada para evaluar las vías moleculares implicadas en la respuesta inmunológica 16-21
El desafío en el modelado de experimentación murino trauma es la investigación a largo plazo, como las técnicas de fijación de la fractura en ratones, puede ser compleja y no fácilmente reproducible. 22-30
Este modelo pseudofracture, un modelo de trauma fácilmente reproducible, supera estas dificultades inmunológicamente simulando un ambiente de fractura de las extremidades, al tiempo que permite la libre circulación en los animales y la supervivencia a largo plazo sin el uso continuo y prolongado de la anestesia. La intención es recrear las características de la fractura de huesos largos; músculo lesionado y el tejido blando están expuestos a los huesos y la médula ósea dañada sin romper el hueso de origen.
El modelo pseudofracture consta de dos partes: una lesión muscular aplastamiento bilateral de las extremidades posteriores, seguida de la inyección de una solución de hueso en los músculos lesionados. La solución de los huesos es preparado por la recolección de los huesos largos de ambos miembros posteriores de su edad y peso con ajuste donantes singénicos. Estos huesos son triturados y luego volvieron a suspender en tampón fosfato salino para crear la solución de los huesos.
Fractura de fémur bilateral es un modelo de uso común y bien establecida de trauma extremo, y fue el modelo comparativo durante el desarrollo del modelo pseudofracture. Entre la variedad de modelos de fractura disponibles, se optó por utilizar un método cerrado de fracturas con lesiones de tejidos blandos como la comparación con el pseudofracture, ya que queríamos un estéril pero grave proporcionalmente modelo de trauma de los tejidos periféricos. 31
El shock hemorrágico es un hallazgo común en el marco de un trauma severo, y la hipoperfusión global agrega un elemento muy relevante para un modelo de trauma. 32-36 El modelo pseudofracture se puede combinar fácilmente con un modelo de shock hemorrágico por un modelo de trauma múltiple de alta severidad 37.
Protocol
Discussion
Pseudofracture, un modelo reproducible murino de trauma musculoesquelético estéril, permite la evaluación de post-traumático respuestas inmunes. El modelo pseudofracture inmunológicamente simulando un entorno de fractura de la extremidad a través de la recreación de las características de una fractura de hueso largo: músculo lesionado y el tejido blando están expuestos a los huesos y la médula ósea dañada sin romper el hueso nativo 38,39 una respuesta inmunitaria bifásica se puede ver a continua…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Fuente de Financiamiento / Número de Biología Molecular del shock hemorrágico GM053789
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical blue pad | Fisher Scientific | 50-7105 | ||
| Sterile Field dressings | Fisher Scientific | NC9517505 | ||
| Circulating heating pad 18″x26″ | Harvard | py872-5272 | ||
| Hot bead instrument sterilizer | VWR | 11156-002 | ||
| Stainless steel tray 8″ x 11″ | VWR | 62687-049 | ||
| Plexiglass boards (10x15x0.5cm) | University of Pittsburgh Machine shop | |||
| Tape rolls 1″ | Corporate Express | MMM26001 | ||
| 50cc conical tube | can be purchased through any global vendor | |||
| Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone) | VWR | 159000-058 | ||
| Oster A5 clippers w. size 40 blade | VWR | 10749-020 | ||
| Surgical scissors (straight – 12cm) | Fine Science Tools | 14068-12 | ||
| Hemostats curved -18cm | Harvard | 81331718 | ||
| Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm) | Fine Science Tools | 11050-10 | ||
| Gauze 4″x4″ | can be purchased through any global vendor | |||
| 1.5cc microfuge tube | can be purchased through any global vendor | |||
| Ice bucket | can be purchased through any global vendor | |||
| Mortar and Pestle | Fisher | 12-961AA | ||
| 1cc syringe w/ 25G needle | Fisher Scientific | 14-826-88 | ||
| 20G needle | can be purchased through any global vendor | |||
| 1mL pipetteman | can be purchased through any global vendor | |||
| 1mL pipette tips | can be purchased through any global vendor | |||
| Falcon polystyrene 8ml tubes | VWR | 60819-331 | ||
| Sterilization pouch 3″x8″ | VWR | 24008 | ||
| Sterilization pouch 5″x10″ | VWR | 24010 | ||
| MacConkey II Agar plate | BD Biosciences | 221172 | ||
| Ethyl Alcohol – 200 proof | Pharmaco-AAPER | [70%] | ||
| Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution) | Ovation | 70mg/kg | ||
| Aerrane (Isoflurane) | Baxter | 99.9% | ||
| Triadine Povidone Iodine (Betadine) | Triad disposables | |||
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | ||||
| Buprenorphine HCl | Bedford Laboratories | 0.1mg/kg |
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