Agar-Block Mikrokosmen für Controlled Pflanzengewebekultur Zersetzung durch aerobe Pilze
Summary
Dieses Video zeigt eine kontrollierte Umgebung Ansatz, um den Abbau von Lignocellulose Pflanzengewebe durch aerobe Pilze zu studieren. Die Fähigkeit, Nährstoffquellen und Feuchtigkeit Kontrolle ist ein wesentlicher Vorteil der Agar-Block Mikrokosmen, aber der Ansatz führt oft gemischtem Erfolg. Wir wenden uns an kritischen Fallstricke, die reproduzierbare, Low-Variabilität Ergebnisse zu erzielen.
Abstract
Die beiden wichtigsten Methoden zur Untersuchung von Pilz-biologischer Abbau von Lignocellulose pflanzlichen Geweben wurden für Holzschutzmittel-Tests (; Agar-Block Boden-Block) entwickelt. Es ist gut angenommen, dass der Boden-Block Mikrokosmen höhere Abbauraten, weniger Feuchtigkeit Probleme, geringere Variabilität unter Studien und höhere Schwellenwerte Konservierungsmittel Toxizität ergeben. Soil-Block-Test ist damit der mehr genutzt Technik und standardisiert wurde von American Society for Testing and Materials (ASTM) (Methode D 1413-07). Der Boden-Block-Design hat jedoch Nachteile, mit lokal variable Boden Quellen und bei der Begrenzung der Kontrolle von Nährstoffen externe (exogene), um die verfallende Gewebe. Diese Nachteile haben als ein Problem bei der Anwendung dieser Methode auf andere, immer beliebter Forschungsziele entwickelt. Diese modernen Zielen gehören erniedrigender Lignocellulose für Bioenergie Forschungs-, Versuchs Sanierung von co-metabolisiert Giftstoffe, die Bewertung oxidative Mechanismen und Tracking transloziert Elemente entlang Hyphen Netzwerke. Soil-Blöcke nicht geeignet genug Kontrolle in diesen Anwendungen. Ein raffiniertes Agar-Block-Ansatz notwendig ist.
Hier verwenden wir die Braunfäule Holz abbauenden Pilz Serpula lacrymans, um Holz in Agar-Block Mikrokosmen degradieren, mit tiefen Petrischalen mit Low-Calcium-Agar. Wir testen die Rolle von exogenen Gips am Zerfall in eine Zeitreihe, um den Nutzen und die erwarteten Schwankungen zeigen. Die Blöcke aus dem Single-Board-rip (Längsschnitt) bedingt sind, gewogen, autoklaviert und aseptisch eingeführt Spitze Kunststoffgitter. Fungal Impfungen sind bei jedem Block Gesicht, mit exogenen Gips added at Interfaces. Ernten sind bis zur endgültigen zerstörerischen Ernte steril. Diese Mikrokosmen sind so konzipiert, blockieren Kontakt mit Agar oder Petrischale Wände zu vermeiden. Kondenswasser wird während der Platte gießt und während der Inkubation minimiert. Schließlich ist Inokulum / Gips / Holz Abstand, aber ohne dass Kontakt minimiert. Diese weniger technische Aspekte der Agar-Block-Design sind auch die häufigsten Ursachen des Scheiterns und die wichtigste Quelle der Variabilität zwischen den Studien. Video Veröffentlichung ist daher in diesem Fall sinnvoll, und wir zeigen Low-Variabilität, qualitativ hochwertige Ergebnisse.
Protocol
Discussion
Mit unserem Agar-Block Set-up (Abbildung 1) Serpula lacrymans wuchs in direkten Kontakt mit dem Gips Oberflächen und in hölzernen Blöcken (Abbildung 2), was zu mehr als 60% Gewichtsverlust in der Kontrollgruppe braun-verrottete Kiefer-Blöcke (Abbildung 3 ). Diese leicht erfüllt die ASTM-Standard Ziel von> 50% Verfall, und die durchschnittliche Variationskoeffizient (C V) in Verfall an war 0,055 16 Wochen. Diese Daten können in Schilling 7 veröffentlicht. Auch hier wird anderen Pi…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Petri dishes | Nunc | 4014 | 25 x 150 mm | |
| Agar, Type A | Sigma | A4550 | ||
| Ammonium nitrate, NH4NO3 | Millinckrodt | 3436-12 | ||
| Potassium phosphate, KH2PO4 | J.T. Baker | 3246-01 | ||
| Magnesium sulfate 7-hydrate, MgSO4•7H2O | Sigma | 230391 | ||
| D-(+)-Glucose | Sigma | G8270 | Dextrose | |
| Boric acid, H3BO4 | Mallinckrodt | 2549-04 | ||
| Zinc sulfate 7-hydrate, ZnSO4•7H2O | Mallinckrodt | 8880-12 | ||
| Manganous chloride 4-hydrate, MnCl2•4H2O | J.T. Baker | 2540-04 | ||
| Copper(II) sulfate 5-hydrate, CuSO4•5H2O | Sigma | 209198 | ||
| Ammonium heptamolybdate 4-hydrate, (NH4)6Mo7O24•4H2O | Sigma-Aldrich | 431346 | ||
| Calcium chloride dihydrate, CaCl2•2H2O | Mallinckrodt | 4160-12 | ||
| Sodium chloride, NaCl | Mallinckrodt | 7581-12 | ||
| Ferrous sulfate 7-hydrate, FeSO4•7H2O | Mallinckrodt | 5056-12 | ||
| Pipet-aid | Drummond | 4-000-110 | Cordless EtOH the surface |
|
| 10 ml sterile polystyrene pipette | BD Biosciences | 357551 | ||
| Gutter Guard | Thermwell Products Co. | VX620 | Pre-scrubbed with soap Hardware store |
|
| Calcium sulfate hemihydrate, CaSO4•0.5H2O | Acros Organics | 385355000 | ||
| #4 cork borer | Boekel | 1601 | ||
| Parafilm “M” | Pechiney | PM-996 |
Referenzen
- ASTM D1413-07. Standard test method for testing wood preservatives by laboratory soil-block cultures. . Annual Book of ASTM Standards. , 185-192 (2007).
- Bravery, A. F. . A miniaturized wood block for the rapid evaluation of wood preservative fungicides. , (1978).
- Low, G. A., Young, M. E., Martin, P., Palfreyman, J. W. Assessing the relationship between the dry rot fungus Serpula lacrymans and selected forms of masonry. Int. Biodeterior. Biodegrad. 46, 141-150 (2000).
- Nicolas, D. Volume I (One/1) – Degradation and Protection of Wood (Syracuse Wood Science Series #5). Wood Deterioration and Its Prevention by Preservative Treatments. , (1973).
- Schilling, J. S. Effects of calcium-based materials and iron impurities on wood degradation by the brown rot fungus Serpula lacrymans. Holzforschung. 64, 93-99 (2010).
