ספירת אדם בתאי גזע עצביים
Summary
ידיעת מספרם המדויק של תאים קיימא נדרש מניפולציות תרבות רבים רקמות. פרוטוקול זה מתאר כיצד להבדיל בין תאים חיים ומתים ולכמת תאים באמצעות hemacytometer. למרות שזה מתאר הספירה האנושית גזע עצביים / מבשר תאים (hNSPCs), ניתן להשתמש בו עבור סוגי תאים אחרים.
Abstract
ידיעת מספרם המדויק של תאים קיימא בנפח נתון של השעיה תא נדרש הרבה רקמות שגרתי מניפולציות תרבות, כגון תאים ציפוי עבור immunocytochemistry או transfections התא. פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה ומהירה הבחנה בין תאים חיים ומתים לכימות ריכוז תאים מספר התאים הכולל שימוש hemacytometer. פרוצדורה זו הראשונה מחייבת ניתוק תאים ממשטח צמיחה resuspending אותם בתקשורת. לאחר מכן, התאים בדילול בתמיסה של Trypan כחול (אידיאלי ריכוז זה ייתן 20-50 תאים לכל רביע) והושמו hemacytometer. לבסוף, מונה בממוצע של תאים קיימא הרביעים שנבחרו באקראי מספר, חלוקת הממוצע לפי נפח של אחד 1 מ"מ 2 ברבע (0.1 μl) ו הכפלה במקדם דילול נותן את מספר התאים לכל l. הכפלה זו על ידי ריכוז תא מהנפח הכולל של μl נותן את מספר התא הכולל. פרוטוקול זה מתאר סופר אנושי גזע עצביים / מבשר תאים (hNSPCs), אך יכול לשמש גם עבור הרבה סוגי תאים אחרים.
Protocol
Discussion
פרוטוקול זה מתאר דרך פשוטה ומהירה על מנת לקבוע את ריכוז התא עבור מגוון של ניסויים הכוללים תאים. באמצעות קיצור הדרך המתוארת 3d, ניתן במהירות ובאופן מדויק לקבוע את ריכוז התאים מספר התא הכולל נפח נתון.
Acknowledgements
המחברים רוצים להכיר ד"ר פיליפ שוורץ ח של המשאבים הלאומיים האדם עצבית לתאי גזע בבית החולים לילדים, אורנג' קאונטי מכון המחקר למתן תרבויות hNSPC.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
Referenzen
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
