Conteo de células madre neurales humanas
Summary
El conocimiento del número exacto de células viables se requiere para muchos manipulaciones de cultivo de tejidos. Este protocolo describe cómo diferenciar entre células vivas y muertas y cuantificar las células usando un hemocitómetro. A pesar de que describe contar humana madre neurales / células precursoras (hNSPCs), que puede ser utilizado para otros tipos celulares.
Abstract
El conocimiento del número exacto de células viables en un determinado volumen de una suspensión celular que se requiere para las manipulaciones rutinarias de cultivo de tejidos, como las células de revestimiento de inmunocitoquímica o para transfecciones celulares. Este protocolo describe un método sencillo y rápido para diferenciar entre células vivas y muertas y la cuantificación de la concentración celular y el número total de células con un hemocitómetro. Este procedimiento requiere en primer lugar separar las células de la superficie de crecimiento y resuspensión de ellos en los medios de comunicación. A continuación, las células se diluyen en una solución de azul tripán (idealmente a una concentración que dará a 20-50 células por cuadrante) y se coloca en el hemocitómetro. Por último, el promedio de los conteos de células viables en varios cuadrantes seleccionados al azar, dividiendo el promedio por el volumen de un cuadrante de 1 mm 2 (0,1 l) y multiplicar por el factor de dilución da el número de células por l. Al multiplicar esta concentración de células por el volumen total en l da el número total de células. Este protocolo describe contar humana madre neurales / células precursoras (hNSPCs), pero también se puede utilizar para muchos tipos de células.
Protocol
Discussion
Este protocolo describe de una manera sencilla y rápida para determinar la concentración de células para una variedad de experimentos con las células. Utilizando el método abreviado descritas en 3D, una forma rápida y precisa de determinar la concentración de células y el número total de células en un volumen determinado.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer al Dr. Philip H. Schwartz de la Comisión Nacional de Recursos Humanos de las células madre neurales en el Hospital Infantil s, Condado de Orange el Instituto de Investigación para proporcionar culturas hNSPC.
Materials
| Material Name | Typ | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
Referenzen
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
