الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hPSCs) لديها القدرة على التعامل مع عدد لا يحصى من الأمراض المختلفة. فائدة هذه الخلايا تكمن في حقيقة أنها يمكن أن تفرق في أي نوع من الخلايا في الجسم. نحن هنا وصف فحص مسخي، والذي يستخدم للتدليل على pluripotence من hPSCs.
الخلايا الجذعية المحفزة (الأمنية) لديها ميزة فريدة من نوعها التي يمكن أن تفرق في الخلايا من جميع الطبقات الجرثومية الثلاث. هذا يجعل منها أداة قيمة محتملة لعلاج أمراض عديدة ومختلفة. مع ظهور الناجم عن الخلايا الجذعية المحفزة (iPSCs)، ومواصلة البحث مع الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) هناك حاجة للفحوصات التي يمكن أن تثبت أن خط الخلية بشكل خاص المحفزة. وكانت سلالة الجرثومية انتقال المعيار الذهبي ليدل على pluripotence من الخلايا الجذعية الجنينية (مسك) خطوط 1،2،3. باستخدام هذا الفحص، يمكن للباحثين تبين أن خط مسك يمكن ان يجعل جميع أنواع الخلايا في الجنين بما في ذلك الخلايا الجرثومية 4. مع الجيل من خطوط ESC الإنسان 5،6، وكان الفحص المناسبة لاثبات pluripotence من هذه الخلايا غير واضح منذ المجالس الاقتصادية والاجتماعية لا يمكن أن الإنسان لا يمكن اختبارها لانتقال سلالة الجرثومية. كبديل، ويستخدم حاليا لفحص مسخي للتدليل على pluripotency الإنسان من الخلايا الجذعية المحفزة (hPSCs) 7،8،9. رغم أن هذا الاختبار قد حان مؤخرا تحت التدقيق ويجري استكشاف التكنولوجيات الجديدة بنشاط، وفحص مسخي هو معيار الذهب الحالية 7. في هذا الاختبار، يتم حقن هذه الخلايا في مسألة الى فأر المناعية للخطر. إذا كانت الخلايا المحفزة، سوف مسخي وضع في نهاية المطاف، وأجزاء من الورم وسوف تظهر الأنسجة من جميع الطبقات الجرثومية 3 10. في مقايسة مسخي، يمكن حقنه hPSCs في مناطق مختلفة من الماوس. مواقع الحقن الأكثر شيوعا تشمل كبسولة الخصية، وكبسولة الكلى والكبد، أو في الساق إما تحت الجلد أو في العضل 11. نحن هنا وصفا لبروتوكول قوية لجيل من teratomas من hPSCs باستخدام كبسولة خصية كموقع لنمو الورم.
الطريقة المعروضة هنا يوفر موثوق بها للغاية، وسيلة واضحة لتوليد teratomas من hPSCs في كبسولة الخصية. هناك العديد من البارامترات الحاسمة في هذه التقنية. على وجه الخصوص، من المهم أن حقن خطوط الخلايا hPSC أن من المعروف أن المحفزة كمجموعة تحكم. المعالم الهامة الأخرى تشمل والفاصل الزمني بين الحقن ومراقبة الورم. لخطوط الخلية مثل WA09، ينبغي مراعاة teratomas في 6-8 أسابيع. لخطوط iPSC جديد نجد أن كثيرا ما يطلب من 10 أسابيع. قلق آخر هو عدد الخلايا حقن. نحن حقن 1000000 الخلايا ولكن يمكن بسهولة الفحص يمكن القيام به مع عدد أقل من الخلايا. وبالإضافة إلى ذلك، وسيلة حقن المهم. نجد أن نحصل على أفضل النتائج عندما يتم حقن هذه الخلايا في خليط 01:01 من matrigel وDMEM/F-12، بدلا من برنامج تلفزيوني أو DMEM/F-12.
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذا العمل عن طريق منح CIRM # TR-1250، RT1-01108، و 00502 CL1.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |