인간 pluripotent 줄기 세포 (hPSCs)은 다양한 질병을 치료하기 위해 무수히 많은 가능성이 있습니다. 이러한 세포의 유틸리티들은 신체의 모든 세포 유형으로 구별 수있다는 사실에있다. 여기 hPSCs의 pluripotence을 설명하는 데 사용됩니다 teratoma 분석을 설명합니다.
Pluripotent 줄기 세포는 (PSCs)들은 세 배아 레이어의 세포로 구별 수있는 독특한 특성이 있습니다. 이것은 그들 여러 질병의 치료를 위해 잠재적으로 유용한 도구가 있습니다. 유도된 pluripotent 줄기 세포 (iPSCs)와 인간 배아 줄기 세포와 지속적인 연구의 출현과 함께 (hESCs) 특정 세포 라인 pluripotent임을 증명할 수있는 assays를위한 필요가있다. Germline 전송 마우스 배아의 줄기 세포 (mESC) 라인 1,2,3의 pluripotence를 시연을위한 황금 표준되었습니다. 이 분석 사용하여 연구자들은 mESC 라인이 배아 세포 네를 포함한 배아에있는 모든 세포 유형을 만들 수있다는 것을 보여줄 수있다. 인간 ESCs가 germline 전송에 대한 검사를받을 수 없기 때문에 인간의 ESC 라인 5,6의 생성을 통해 이러한 세포의 pluripotence 증명할 수있는 적절한 분석은 불분명했습니다. 대리로서 teratoma 분석은 현재 pluripot을 설명하는 데 사용됩니다인간 pluripotent 줄기 세포 ency (hPSCs) 7, 8, 9. 이 분석은 최근 주목 받고왔다하고 새로운 기술을 적극적으로 모색되고 있지만, teratoma 분석은 현재 금 본위 7입니다. 본 분석에서는 문제의 세포는 면역 손상 마우스에 주입된다. 세포 pluripotent 경우 teratoma 결국 개발되고 종양의 섹션은 3 개의 배아 층 10 일부터 조직을 보여줍니다. teratoma 분석에서는 hPSCs는 마우스의 다른 분야로 주입 할 수 있습니다. 또는 다리 중 subcutaneously 또는 intramuscularly 11로, 가장 일반적인 사출 사이트 testis 캡슐, 신장 캡슐, 간 등이 있습니다. 여기에서 우리는 종양 성장을위한 사이트로 testis 캡슐을 사용 hPSCs에서 기형종의 생성을위한 강력한 프로토콜을 설명합니다.
여기에 제시된 방법은 testis 캡슐에 hPSCs에서 기형 종을 발생시키는 매우 안정적이고 직접적인 수단을 제공합니다. 이 기법의 몇 가지 중요한 매개 변수가 있습니다. 특히, 그것은 통제와 같은 pluripotent 것으로 알려져 있습니다 hPSC 세포 라인을 주입하는 것이 중요합니다. 다른 중요한 파라미터는 분사와 종양 관찰 사이의 시간 간격이 포함됩니다. WA09 같은 세포 라인의 경우, 기형 종은 6~8주에서 관찰되어야한다. 새로운 iPSC 라인의 경우 우리는 자주 10주이 필요다는 것을 찾을 수 있습니다. 또 다른 우려는 주입된 세포의 숫자입니다. 우리가 백만 세포를 주입했지만 검정은 쉽게 적은 수의 세포로 할 수 있습니다. 또한, 사출 매체는 중요하다. 우리는 PBS 또는 DMEM/F-12 반대로 세포, matrigel과 DMEM/F-12의 1:1 혼합물에 주입 때 우리가 최상의 결과를 얻을 것을 발견했습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 CIRM 보조금 # TR-1250, RT1-01108 및 CL1-00502에 의해 재정 지원되었다.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Accutase | Invitrogen | A1110501 |
DMEM/F-12 | Invitrogen | 113300-032 |
Matrigel | BD Biosciences | 354277 |