TGF - β - 유발 침략을 측정하는 회전 타원체 분석
Summary
양적 성장 인자 (TGF) – β – 유도 3 차원 콜라겐 젤의 침공을 변형 측정하는 분석이 설명되어 있습니다. 이 분석은 유방암 개발의 다른 단계를 나타내는 세포 라인의 MCF10A 시리즈의 활용합니다. 이 방법은 다른 세포 라인과 함께 사용하는 다른 가능성 activators 또는 침해의 억제제를 조사하기 위해 사용될 수 채택 수 있습니다.
Abstract
TGF – β는 초기 단계에서 종양 억제 역할을하지만, 나중에 무대 1,2에서 침략과 전이를 자극하여 유방암의 진행에서 역할을 반대했다. 또한, TGF – β가 자주 유방암에 overexpressed과 그 표현이 불쌍한 예후와 전이 3,4와 상호입니다. TGF – β 유도의 공격을 잘 이해하지하는 메커니즘.
TGF – β는 TGF – β 타입 II (TβRII)와 유형 I (TβRI) 수용체를 통해 세포의 반응을 elicits. TGF – β – 유발 heteromeric 복잡한 형성되면, TβRII는 TβRI을 phosphorylates. 활성 TβRI는 phosphorylating 수용체 Smads (R – Smads), 즉 Smad2 및 Smad3하여 세포내 표준 신호 경로를 시작합니다. 이러한 활성 R – Smads는 핵에 축적하고 목표 유전자 5 전사를 조절 Smad4와 heteromeric 단지를 형성하고 있습니다. 이전에 D 이외에escribed Smad 경로, 여러 비 Smad 신호 경로의 활성화에 수용체 활성화 결과가 예를 들어 Mitogen는 단백질 키나제를 활성화하면 (MAPK) 경로 6.
유방암의 여러 단계에서 TGF – β의 역할을 연구하기 위해, 우리는 MCF10A 전지 시스템을 사용했다. 이 시스템은 자발적으로 남을 MCF10A1 (M1) 유방 상피 세포를 7로 구성되어, H – RAS는 생쥐 8 premalignant 병변을 생산 M1 – 파생 MCF10AneoT (M2), 그리고에서 설립되었습니다 M2 – 파생 MCF10CA1a (M4)를 변형 M2 xenografts 및 양식 폐 9 전이하는 능력을 가지고 고급 carcinomas. 이 MCF10A 시리즈는 다른 유전 배경에 의해 편견없는 강한 악의의 다른 성적 세포의 반응을 연구하기위한 가능성을 제공합니다.
TGF – β – 유발 침략의 분석을 위해, 우리는 homotypic MCF10A 회전 타원체 셀 문화 embe를 생성시험 관내 (그림 1)에서 3D 콜라겐 매트릭스에 dded. 이러한 모델은 밀접하게 회전 타원체 10 내부에 괴사성도 외부와 정지 또는 세포에 대한 활성화 및 침입 세포의 결과로, 산소와 영양소의 그라데이션을 확립하여 생체내 인간의 종양과 유사. 회전 타원체 기반 assays는 monolayer 문화 11 이상의 약물 저항을 잘 요점을 되풀이하는 표시되었습니다. 이 MCF10 3D 모델 시스템은 우리가 강한 악의의 다른 단계에서 유방암 세포의 침투 특성에 TGF – β 신호의 영향을 조사 수있었습니다.
Protocol
Discussion
우리는 MCF10A1 세포와 악성 유도체는 TGF – β – 의존적으로 콜라겐 매트릭스에 침공하는 회전 타원체 모델을 설립했습니다. 첫째, spheroids은 메틸 셀룰로오스의 면전에서 96 우물 원형 바닥 서스펜션 플레이트를 형성하고 있습니다. 물론, 또한 U – 모양의 폴리 – HEMA 코팅 플레이트는 이러한 목적을 위해 사용될 수 있습니다. 세포 메틸 셀룰로오스의 부재에 죽을 이후 메틸 셀룰로오스는 절대적으로,이 …
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 세포 라인을위한 시약 및 프레드 밀러 (바바라 앤 Karmanos 암 Intitute, 디트로이트, 미국)의 켄 이와타 (OSI 제약, 뉴욕, 미국)에게 감사하고 있습니다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Methyl cellulose | Sigma-Aldrich | M0512 | |
| PureCol | Advanced Biomatrix | 5005-B | |
| pH indicator strips | Merck | 9533 | |
| 96-well suspension plates |
Greiner Bio-one | 650 185 | |
| 96-well adhesion TC plates |
Greiner Bio-one | 655 180 |
Referenzen
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