Clonage moléculaire

Le clonage moléculaire est un ensemble de méthodes, qui sont utilisées pour insérer un ADN recombinant dans un vecteur – un porteur de molécules d’ADN qui va répliquer les fragments d’ADN recombinant dans les organismes hôtes. Le fragment d’ADN, qui peut être un gène, peut être isolé depuis un spécimen procaryote ou eucaryote. Après l’isolation du fragment d’intérêt, ou insert, le vecteur et l’insert doivent être coupés avec les enzymes de restriction et purifiés. Les morceaux purifiés sont unis via une technique appelée ligation. L’enzyme qui catalyse la réaction de ligation est connue sous le nom de ligase.

Cette vidéo explique les méthodes principales qui sont combinées, en tandem, pour faire partie de la procédure globale de clonage moléculaire. Les aspects critiques du clonage moléculaire sont discutés, tels que le besoin d’une stratégie de clonage moléculaire et comment suivre la trace des colonies bactériennes transformées. Les étapes de vérification, comme la vérification dans les plasmides purifiés de la présence d’insert avec digests de restriction et le sequençage, sont aussi mentionnés.