Tout le mont immunomarquage des récepteurs olfactifs neurones dans le<em> Drosophila</em> Antenne
Summary
Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Abstract
Molécules odorantes se lient à leurs récepteurs cibles d'une manière précise et coordonnée. Chaque récepteur reconnaît un signal spécifique et transmet cette information au cerveau. En tant que tel, de déterminer comment l'information olfactive est transféré vers le cerveau, modifiant à la fois la perception et le comportement, l'enquête de fond. Fait intéressant, il est évident que des facteurs de transduction cellulaire et la transcription sont impliqués dans la diversification de neurone récepteur olfactif. Ici, nous fournissons un support de l'ensemble robuste méthode de marquage immunologique pour doser olfactif organisation in vivo des neurones récepteurs. En utilisant cette méthode, nous avons identifié tous les neurones récepteurs olfactifs avec l'anticorps anti-ELAV, un marqueur pan-neuronal connu et Or49a-mCD8 :: GFP, un neurone récepteur olfactif spécifiquement exprimée dans Nba neurone en utilisant un anticorps anti-GFP.
Introduction
Le système olfactif est utilisé pour faire la distinction entre une immense variété de molécules odorantes et ensuite envoyer les informations résultant des centres supérieurs du cerveau. Cette entrée est utilisée pour contrôler avec précision les comportements animaux fondamentales, telles que l'alimentation et l'accouplement 1-6. Comme chaque type de neurone olfactif est associée à un ensemble spécifique d'odeurs, la diversification des neurones récepteurs olfactifs (ORN) s est essentiel pour le fonctionnement du système olfactif bon 7.
Génétique de la Drosophile nous permet d'effectuer des investigations au niveau de la cellule unique impliquant des mécanismes moléculaires associés au développement de ORN et la fonction physiologique 8-16. Tout le immunomarquage montage de la drosophile antennes nous a permis de comprendre plus en détail les mécanismes moléculaires impliqués dans la diversification des neurones récepteurs olfactifs (ORN) s 7. Ici, nous fournissons une description détaillée d'une méthode simple pour acHieve cela.
Protocol
Representative Results
Discussion
La dissection de l'antenne Drosophila nous décrivons est simple et facile à réaliser dans un environnement de laboratoire. Pour assurer une dissection de succès, il est essentiel d'utiliser des ciseaux bien tranchants. Alors que la coloration immunologique antenne disséqué, il est important de les incuber dans un récipient rempli d'humidité pour éviter l'évaporation de la solution d'anticorps. L'antenne disséqué a tendance à flotter dans la solution. Utilisation de 0,1% de T…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette étude a été financée par le Programme MEXT-prise en charge de la Fondation pour la recherche stratégique dans les universités privées et JSPS Young Scientist B subvention pour HT Nous tenons à remercier Ohtake Norihito pour éditer les clips vidéo.
Materials
| Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
| Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
| Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
| Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
| Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |
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