인간의 전립선 암 샘플에서 암 줄기 세포의 분리
Summary
직접 인체 조직에서 암 줄기 세포 (암줄 기세포)의 분리는 생물학적 특성 분석을위한 필수입니다. 또한 어려운 단계를 문제 해결에 대한 팁을 제공하면서이 원고는, 인간의 조직에서 전립선 암줄 기세포의 분리를위한 방법을 설명합니다.
Abstract
암 줄기 세포 (CSC) 모델은 상당히 지난 20 년간 재 방문하고있다. 이 시간 동안 암줄 기세포를 확인하고 직접 고립 된 인간의 조직에서 순차적으로 일반적으로 유동 세포 계측법에 의해 세포와 분별의 모집단의 항체 라벨링을 통해, 면역 결핍 쥐에 전파되었다. 그러나, 전립선 암의 유일한 임상 적 특징은 상당히 신선한 인간 종양 샘플에서 전립선 CSC 추가의 연구를 한정 하였다. 우리는 최근 자신의 HLA 클래스 I (HLAI) 음성 표현형의 미덕에 의해 직접 인체 조직에서 전립선 암줄 기세포의 분리를보고했다. 전립선 암 세포는 수술 표본에서 수확 기계적으로 분해된다. 세포 현탁액은 생성과 형광 복합 HLAI과 기질 항체가 표시되어 있습니다. HLAI 부정적인 세포의 모집단은 마지막으로 유동 세포 계수기를 사용하여 격리됩니다. 이 프로토콜의 주요 제한은 자주 현미경 및 다 초점 본성전립선 절제 표본의 기본 암. 그럼에도 불구하고, 고립 된 라이브 전립선 암줄 기세포는 면역 결핍 마우스에 이식하여 분자 특성 및 기능 검증에 적합하다.
Introduction
종양 내 이질 암 (1)의 특징으로 간주됩니다. 실제로, 종양 내 이성의 몇 가지 메커니즘이 유전자 변이와 미세 환경과의 상호 작용을 포함하여 기술되었다. 또한, 일부 암은 직렬 이식 분석 2-5 종양 개시 용량과 자기 갱신의 특성을 나타내는 암 줄기 세포 (암줄 기세포)의 모집단으로 셀룰러 계층 구조를 포함 할 수있다. 초기에 혈액 6, 유방 7 뇌 8 악성 종양에 설명, 암줄 기세포는 전립선 암 9-12뿐만 아니라 다른 종양 유형 2-5에서 연구되고있다.
암줄 기세포는 일반적으로 이종 인구 2-5 내에서 세포 부분으로 간주됩니다. 따라서 암줄 기세포의 기능 및 분자 특성은 대량 집단에서 자신의 농축에 달려있다. 따라서, 지난 20 년간 여러 가지 사항이 충족CSC 농축 hodologies는 일반적으로 유동 세포 계측법에 의해 표시 인구의 분리를 포함하는 고안되었다. 또한, 암줄 기세포의 연구에 중요한 고려 사항은 인체 조직의 계층 적 조직 등의 문화 또는 면역 결핍 생쥐의 일련 계대으로 실험 조작에 의해 중단 될 수 있다는 것이다. 그 결과, 인간의 조직으로부터의 직접적인 CSC 추가 절연은 CSC 분야에서 중요한 방법으로 떠오르고있다.
전립선 암은 암 이환율 및 미국 및 세계 (13) 주변의 사망의 주요 원인이다. 따라서, 전립선 암줄 기세포의 분리 및 생물학적 특성은 상당한 관심입니다. 전립선 암줄 기세포는 이전 세포주, 환자 유래의 이종 이식, 낮은 통로 환자 파생 된 서스펜션 문화 9,10,12,14에서 풍성하게한다.
우리는 최근에 직접적으로 인간의 수술들에서 전립선 암줄 기세포의 분리를보고자신의 HLAI 음성 세포 표면 표현형 (10)의 미덕 amples. 여기서 자세하게는 이들 세포의 분리를 위해 구현 된 절차를 우리. 전립선 종양 수술 표본에서 수확 세포 현탁액으로 만들어집니다. 세포는 다음 HLAI에 대한 항체뿐만 아니라 간질과 생존 마커를 사용하여 염색하고, 암줄 기세포는 형광 활성화 된 셀 정렬 (FACS)에 의해 격리됩니다. 고립 된 암줄 기세포는 가능한 세포를 필요로하는 분석에 사용할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 프로토콜은 신선한 인간의 전립선 암 조직에서 암줄 기세포의 분리에 대해 설명합니다. 몇 가지 중요한 고려 사항은이 프로토콜의 성공적인 결과에 영향을 미친다.
가능한 전립선 암 세포의 높은 숫자의 회복 수술 견본 조심 총 평가에 의존한다. 거시적 종양 결절이 관찰 10을 처리 할 때 우리의 경험에서, 종양 형성 전립선 세포의 성공적인 분리가 가장 확실하다….
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 하리리 가족 재단과 TJ 마텔 재단에 의해 지원되었다.
Materials
| RPMI | Gibco Life Technologies | 11875-093 | |
| Fetal bovine serum | Gibco Life Technologies | 10437-028 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15140-122 | |
| PBS | Corning cell gro | 21-031-CM | |
| 60 mm-15 mm cell culture dish | Corning | 3295 | |
| 35 µm Cell Strainer | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml conial tube | Crystalgen | 23-2263 | |
| 15 ml conical tune | Crystalgen | 23-2265 | |
| Red blood cell lysing buffer | Sigma | R7757 | |
| HLA class I (W6/32) PE antibody | Abcam | ab43545 | |
| CD31 FITC antibody | ebioscience | 11-0319-42 | |
| CD45 FITC antibody | Abcam | ab27287 | |
| IgG2aκ PE antibody | BD Pharminogen | 555574 | |
| IgG1κ FITC antibody | BD Pharminogen | 551954 | |
| DAPI | Invitrogen | d3571 | |
| 12 x 75 mm polystyrene tubes with cell strainer cap | BD Falcon | 352235 | |
| Vortex Mixer | Crystalgen | CG-BV1000 | |
| 10% Neutral Buffer Formalin | Fisher | RBBP-0480 |
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