ソリッド検体からの原発性卵巣癌細胞を得る方法
Summary
本研究では、固体の臨床検体からの原発性卵巣癌細胞の単離および特徴付けのための詳細な方法を記載している。卵巣癌臨床検体は、下流の用途に非常に適した生存可能な、線維芽細胞を含まない上皮性卵巣癌（EOC）細胞を得るために酵素消化に供される。
Abstract
卵巣癌の発生および進行を調査するための信頼性の高いツールが緊急に必要とされている。卵巣癌細胞株の使用は、卵巣癌を理解するための貴重なツールのままで、それらの使用は多くの制限がある。これらは、異質性の欠如および拡張のin vitro継代に関連した遺伝子変異の過多があります。ここでは、手術時に回収した固体臨床検体を形成原発性卵巣癌細胞の迅速な確立を可能にする方法を記載している。この方法は、30分間酵素消化に臨床検体を施すからなる。単離された細胞懸濁液を増殖させ、薬物スクリーニングを含め下流側のアプリケーションのために使用することができる。確立された卵巣癌細胞株上の原発性卵巣癌細胞株の利点は、それらが由来し、異なる部位か否かに由来することができる元の特定の臨床検体の代表的なものであるということで一応RYまたは転移性卵巣癌。
Introduction
その比較的低い発生率にもかかわらず、卵巣癌は婦人科疾患と女性の1,2のがんによる死亡の第五の主要な原因の最も致命的である。これは主に忠実疾患3の開始および進行を再現信頼性の高いツールとモデルの不足が原因です。卵巣癌についての我々の知識今日のほとんどは、腹水から回収4-7不死化卵巣表面上皮細胞（IOSが）、卵巣癌細胞株および原発性卵巣癌細胞の使用により可能であった。残念ながら、それらの使用は、不死化プロセスまたは体外路及び腹水製剤から得られた集団の異質性に関連する遺伝的および表現型変化の数など、いくつかの制限があります。
そのため、卵巣癌の特定可能な、特定の固体標本由来の初代卵巣癌細胞はuniquを表す卵巣癌の進行を研究するための電子ツール。
これらの悪性細胞の取得に必要な主な困難は、生存率およびこれらのEOC細胞の培養における増殖能力の早期不足の損失に伴う間質細胞や線維芽細胞の異常増殖によるものである。固形腫瘍からの単細胞懸濁液を作成するには、いくつかの方法が、現在、しかし、特定の技術が有利な結果8より多くの量が得られ、機械的手段または酵素的解離によって、存在しています。ここでは、実行可能な、線維芽細胞のないEOC細胞の効果的な回復のディスパーゼIIの結果とその酵素消化を示しています。このようにして得られたEOC培養物は、遺伝子操作を非常に受けやすいと薬物スクリーニング試験においても有用であり、これらのEOC培養物は、多くの下流の用途に適していることを示している。
Protocol
Representative Results
Discussion
卵巣がんの病因と開発のより良い理解は、この壊滅的な疾患に罹患した女性の結果を改善することが重要です。この文脈での使用が確立され、「市販の「卵巣癌細胞株は、間違いなく飛躍的に有用であった。しかし、今日、我々は癌細胞株は、彼らが異質9,10の欠如など、多くの面で由来するヒト腫瘍を代表するものではないことを知っている。
ここでは、直接?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、患者の組織サンプルの収集の支援については、ミネソタ大学の組織調達施設のスタッフに感謝したいと思います。この作品は、MBにし、MBに婦人科腫瘍学部門の資金によってミネソタ卵巣がんのアライアンスにより、MBにランディシェーバー癌研究およびコミュニティ基金によるMBに国防総省の卵巣癌研究プログラム（OCRP）OC093424、サポートされていました。資金提供者は、研究デザイン、データ収集と分析、公開することを決定、または原稿の準備に何の役割がありませんでした。
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| REAGENTS: | |||
| 1X PBS, sterile | Invitrogen | 14190-144 | |
| Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific) | Thermoscientific | 02 1090 | |
| DMEM medium, sterile | Invitrogen | 11995-065 | |
| Fetal bovine serum, sterile | Thermo Scientific Hyclone | SH30396.03 | |
| 100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen) | Invitrogen | 15140-122 | |
| Dispase II, sterile (Roche) | Roche | 04942 078 001 | |
| Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile | Fisher Scientific | forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D | |
| Small dissecting scissors, sterile | Fisher Scientific | 08-945 | |
| 15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352097 | |
| 50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352027 | |
| 10 ml serological pipette, sterile | Corning | 13-678-11E | |
| 6 ml syringe plunger, sterile | Tyco Healthcare | 8881516911 | |
| Nylon filter (70 μm ) cell strainer, sterile (BD Falcon) | BD Falcon | 352350 | |
| 5-cm Petri dish, sterile | Corning | 430166 | |
| 10-cm Petri dish, sterile | Corning | 430167 |
Referenzen
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