Método para la obtención de las células del cáncer de ovario primarios a partir de muestras sólidas
Summary
Este estudio describe un método detallado para el aislamiento y caracterización de células de cáncer de ovario primarios de muestras clínicas sólidos. Especímenes clínicos sobre el cáncer de ovario son sometidas a digestión enzimática para obtener, fibroblastos-epitelial libre de cáncer de ovario de células viables (EOC) muy adecuada para aplicaciones posteriores.
Abstract
Se necesitan con urgencia herramientas fiables para la investigación de cáncer de ovario iniciación y progresión. Mientras que el uso de líneas celulares de cáncer de ovario sigue siendo una herramienta valiosa para comprender el cáncer de ovario, su uso tiene muchas limitaciones. Estos incluyen la falta de heterogeneidad y la plétora de alteraciones genéticas asociadas con pases prolongado in vitro. Aquí se describe un método que permite la rápida creación de células de cáncer de ovario primarios forman especímenes clínicos sólidos recogidos en el momento de la cirugía. El método consiste en someter las muestras clínicas a la digestión enzimática durante 30 min. Se deja que la suspensión de células aisladas a crecer y se puede utilizar para la aplicación aguas abajo incluyendo la detección de drogas. La ventaja de líneas celulares de cáncer de ovario primarios más de líneas celulares de cáncer de ovario establecidas es que son representativas de las muestras clínicas originales específicas que se derivan de y pueden ser derivados de diferentes sitios si a simplecáncer de ovario RY o metastásico.
Introduction
A pesar de su relativamente baja incidencia, el cáncer de ovario es el más mortal de las enfermedades ginecológicas y la quinta causa principal de muerte por cáncer entre las mujeres 1,2. Esto se debe principalmente a la falta de herramientas fiables y modelos que recapitulan fielmente la iniciación y progresión de la enfermedad 3. La mayor parte de nuestro conocimiento hoy en día sobre el cáncer de ovario ha sido posible mediante el uso de células inmortalizadas de ovario epiteliales superficiales (IOSes), líneas celulares de cáncer de ovario y células de cáncer de ovario primarios recuperados de fluido ascítico 4-7. Desafortunadamente, su uso tiene varias limitaciones, incluyendo un número de cambios genéticos y fenotípicos asociados con proceso de inmortalización o en pasajes in vitro y la heterogeneidad de la población resultante de la preparación de fluido ascítico.
Por lo tanto, las células de cáncer de ovario primarios derivados de muestras sólidas identificables y específicos de cáncer de ovario representan una unique herramienta para el estudio de la progresión del cáncer de ovario.
Las principales dificultades de las que obtienen estas células malignas se deben a un crecimiento excesivo de las células del estroma o fibroblastos junto con la pérdida de la viabilidad y la falta prematura de la capacidad proliferativa en el cultivo de estas células EOC. Actualmente, existen diversos métodos para crear suspensiones de una sola célula de tumores sólidos, a través de medios mecánicos o disociación enzimática, sin embargo ciertas técnicas producen una mayor cantidad de la solución preferida 8. Aquí, mostramos que la digestión enzimática con dispasa II resulta en una recuperación efectiva de células EOC-fibroblastos libre viables. Los cultivos de EOC así obtenidos son altamente susceptibles a la manipulación genética y también son útiles en pruebas de detección de drogas, lo que indica que estos cultivos EOC son adecuados para muchas aplicaciones posteriores.
Protocol
Representative Results
Discussion
Una mejor comprensión de la etiología del cáncer de ovario y el desarrollo es crucial para mejorar el resultado de las mujeres afectadas por esta enfermedad devastadora. En este contexto, el uso de establecida y "comercialmente disponible" línea celular de cáncer de ovario, sin duda, ha sido tremendamente útil. Sin embargo, hoy sabemos que las líneas celulares de cáncer no son representativos del tumor humano se originaron en muchos aspectos, incluyendo la falta de heterogeneidad 9,10.
<…Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nos gustaría dar las gracias al personal del Servicio de Adquisiciones de Tejidos de la Universidad de Minnesota para obtener ayuda con la recolección de muestras de tejido de pacientes. Este trabajo fue apoyado por el Departamento de Defensa de los Programa de Investigación de Cáncer de ovario (OCRP) OC093424 a MB, por la máquina de afeitar de la Investigación del Cáncer y el Fondo Randy Comunidad MB, por el ovario Cancer Alliance Minnesota para MB y por el fondo de Oncología Ginecológica Departamental de MB. Los financiadores no tenía papel en el diseño del estudio, recogida y análisis de datos, decisión a publicar, o la preparación del manuscrito.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| REAGENTS: | |||
| 1X PBS, sterile | Invitrogen | 14190-144 | |
| Screw lid, polypropylene specimen container, sterile (Thermoscientific) | Thermoscientific | 02 1090 | |
| DMEM medium, sterile | Invitrogen | 11995-065 | |
| Fetal bovine serum, sterile | Thermo Scientific Hyclone | SH30396.03 | |
| 100x penicillin-streptomycin, liquid (Invitrogen) | Invitrogen | 15140-122 | |
| Dispase II, sterile (Roche) | Roche | 04942 078 001 | |
| Small fine-tip forceps and scalpel blade, sterile | Fisher Scientific | forceps: 08-953E, blades: 08-927-5D | |
| Small dissecting scissors, sterile | Fisher Scientific | 08-945 | |
| 15 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352097 | |
| 50 ml conical capped tubes, sterile (BD Falcon) | BD, Falcon | 352027 | |
| 10 ml serological pipette, sterile | Corning | 13-678-11E | |
| 6 ml syringe plunger, sterile | Tyco Healthcare | 8881516911 | |
| Nylon filter (70 μm ) cell strainer, sterile (BD Falcon) | BD Falcon | 352350 | |
| 5-cm Petri dish, sterile | Corning | 430166 | |
| 10-cm Petri dish, sterile | Corning | 430167 |
Referenzen
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