キャピラリーチューブ、Creamatocritによって乳脂肪含量の推定を用いたラットにおける牛乳コレクション
Summary
Milk is a primary source of nutrition for the neonate. Analysis of milk components may provide insight into maternal factors that affect offspring health. This protocol describes a manual method of collecting milk samples from the lactating rat, which can then be used for further downstream analysis.
Abstract
Milk, as the sole source of nutrition for the newborn mammal, provides the necessary nutrients and energy for offspring growth and development. It also contains a vast number of bioactive compounds that greatly affect the development of the neonate. The analysis of milk components will help elucidate key factors that link maternal metabolism and health with offspring growth and development. The laboratory rat represents a popular model organism for maternal studies, and rat milk can be used to examine the effect of various maternal physiological, nutritional, and pharmacological interventions on milk components, which may then impact offspring health. Here a simple method of manually collecting milk from the lactating rat that can be performed by a single investigator, does not require specialized vacuum or suction equipment, and provides sufficient milk for subsequent downstream analysis is described. A method for estimating the fat content of milk by measuring the percentage of cream within the milk sample, known as the creamatocrit, is also presented. These methods can ultimately be used to increase insight into maternal-child health and to elucidate maternal factors that are involved in proper growth and development of offspring.
Introduction
ミルクは乳児の成長と発展の1,2のためのエネルギーや栄養素を提供し、新生児の哺乳動物のための唯一の栄養源です。ミルクは、主に、細胞、脂質、およびタンパク質1で構成されている間、それはまた、酵素、炭水化物、ホルモン、抗体、成長因子、サイトカイン、エキソソーム、マイクロベシクル、及びそのような低分子RNAを含む子孫の若年期の発達を調節する生物活性化合物の多数を含んでいますマイクロRNA 1,2として。幼児は病気2を受けにくい母乳証拠と相まって免疫子孫と腸の健康3の確立に母乳の基本的な役割は、人生の早い段階で病気のプロセスに関連付けられたミルク成分と関与する分子メカニズムを識別することの重要性を強調して彼らの行動です。開発ラットは早い段階で、栄養様々な生理学的、および化学的介入の効果を調べるための人気モデルであります-Life開発4。ラットのミルクの分析は、したがって、母体および子孫の健康に新たな洞察を提供してもよいです。
現在の科学の進歩は今健康と病気の特定の乳成分の効果の詳細な調査のための機会を増やしています。例えば、牛乳細菌プロファイルのシークエンスが幼児の腸5の初期の腸の植民地化におけるそれらの役割を解明した、ミルクオリゴ糖の質量分析は、母体の食事6、中に分泌マイクロRNAの深いシーケンシングを介しミルクオリゴ糖プロフィールの変更への洞察を提供してきました母乳の脂肪球は、遺伝子転写、代謝、および免疫機能7の可能な役割を強調しています。
ラットモデルは、母体の研究8,9で使用される最も人気のあるモデル生物の1つを表します。一つの利点は、唯一approximat持続が短い妊娠及び授乳期間であり、エリー21日各;したがって、授乳に妊娠の開始からの合計時間は貴重なデータを生成することができる時間の短い期間を示します。マウスと比較してラットの大きなサイズは、ミルクのコレクションとの関連で、ミルクおよびミルクの収集の容易さの体積に対して有意な利点を提供し得ます。マウスでの牛乳の生産は、例えば、より多くのミルク10を生成する重いマウスを用いた全体重に依存するように思われます。
ここでは、授乳中のラットからミルクを手動で収集するための一般的な説明が提供されています。このプロトコルは、最小限の設備を必要とする、非侵襲性で、安価で、さらに下流の分析のためにミルクの適切なボリュームを収集するために使用することができます。簡単に言えば、ダムはミルクレットダウンは、オキシトシンによって刺激され、イソフルランで麻酔され、ミルクはミルクのマニュアル発現によりキャピラリーチューブに回収されます。最後に、ミルクの2つの主要コンポーネントは、簡単なdescriptio脂肪とタンパク質であるとして、creamatocrit測定値11及び標準的なタンパク質アッセイを使用して総タンパク質濃度の定量化を用いて、乳脂肪含有量を推定するnが示されています。
Protocol
Representative Results
Discussion
Investigations into maternal milk components have increased as interest in early life development research rises. As the sole source of nutrition during the neonatal period, the bioactive compounds in milk are essential for ideal growth and development, especially in the context of intestinal and immune health3. The method presented here is a simple, non-invasive method of collecting milk from the lactating rat in amounts sufficient for downstream analysis, such as oligosaccharide profiling6. The me…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、自然科学とカナダの工学研究評議会（RGPIN 238382から2011）およびヘルスリサーチ（MOP115076）のカナダの研究所からの助成金を介してサポートされていました。ヘザー・ポールは、自然科学とカナダの工学研究審議会大学院奨学金とアルバータ革新健康ソリューション奨学金によってサポートされていました。ミーガン・ハラムは、自然科学と工学研究評議会大学院奨学金、フレデリック・バンティングとチャールズベストカナダ大学院奨学金、およびアルバータ州の小児病院研究所研修遺伝学賞、子どもの発達、および健康によってサポートされていました。
Materials
| Equipment – Milking | |||
| 1 ml syringes | BD-Canada | 309602 | |
| 25 G needles | BD-Canada | 305122 | |
| 18 G needles | BD-Canada | 305196 | |
| 50 ul Microdispenser Capillary Tubes | Fisher Scientific | 21-169D | |
| Oxytocin (20 USP Units/ml) | Bimeda-MTC | 1OXY015 | |
| PPC Vet Isoflurane Inhalation Anesthetic, 250 ml | Fresenius Kabi | M60302 | Used on the order of a veterinarian |
| Sterile Alcohol Prep Pad | Dukal | 853 | |
| Absorbent Bench Underpad | VWR | 82020-845 | |
| Maxi-Therm Hyper/Hypothermia Blanket | Cincinnati Sub-Zero | 274 | |
| Rodent Anesthesia Machine with Vaporizer | Benson Medical Industries Inc. | Subject to individual laboratory needs | |
| Animal Masks | Benson Medical Industries Inc. | 50100/50102 | |
| Microcentrifuge Tubes | Axygen | MCT-060-C | |
| ChroMini Professional Trimmer | Wahl | – | |
| Equipment – Creamatocrit | |||
| StatSpin SafeCrit Plastic Microhematocrit Tubes (Untreated) | Fisher Scientific | 22-274-914 | |
| Critoseal Capillary Tube Sealant Tray | VWR | 470161-478 | |
| StatSpin CritSpin Microhematocrit Centrifuge | Beckman Coulter, Inc | X00-004999-001 |
Referenzen
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