VacuSIP, bir Geliştirilmiş INEX Yöntemi için<em> In Situ</em> Partikül Ölçümü ve Çözünmüş bileşikler Aktif Süspansiyon besleme üniteleri İşlenmiş
Summary
We introduce the VacuSIP, a simple, non-intrusive, and reliable method for clean and accurate point sampling of water. The system was developed and evaluated for the simultaneous collection of the water inhaled and exhaled by benthic suspension feeders in situ, to cleanly measure removal and excretion of particulate and dissolved compounds.
Abstract
Benthic suspension feeders play essential roles in the functioning of marine ecosystems. By filtering large volumes of water, removing plankton and detritus, and excreting particulate and dissolved compounds, they serve as important agents for benthic-pelagic coupling. Accurately measuring the compounds removed and excreted by suspension feeders (such as sponges, ascidians, polychaetes, bivalves) is crucial for the study of their physiology, metabolism, and feeding ecology, and is fundamental to determine the ecological relevance of the nutrient fluxes mediated by these organisms. However, the assessment of the rate by which suspension feeders process particulate and dissolved compounds in nature is restricted by the limitations of the currently available methodologies. Our goal was to develop a simple, reliable, and non-intrusive method that would allow clean and controlled water sampling from a specific point, such as the excurrent aperture of benthic suspension feeders, in situ. Our method allows simultaneous sampling of inhaled and exhaled water of the studied organism by using minute tubes installed on a custom-built manipulator device and carefully positioned inside the exhalant orifice of the sampled organism. Piercing a septum on the collecting vessel with a syringe needle attached to the distal end of each tube allows the external pressure to slowly force the sampled water into the vessel through the sampling tube. The slow and controlled sampling rate allows integrating the inherent patchiness in the water while ensuring contamination free sampling. We provide recommendations for the most suitable filtering devices, collection vessel, and storing procedures for the analyses of different particulate and dissolved compounds. The VacuSIP system offers a reliable method for the quantification of undisturbed suspension feeder metabolism in natural conditions that is cheap and easy to learn and apply to assess the physiology and functional role of filter feeders in different ecosystems.
Introduction
Bentik süspansiyon besleyiciler deniz ekosistemlerinin 1 işleyişinde temel rol oynamaktadır. Su 2,3 geniş hacimli filtreleyerek, onlar kaldırmak ve partiküler (plankton ve detritus) ve (burada ve referanslar) çözünmüş bileşikler 1 ifraz ve bentik-pelajik bağlantı 4,5 ve besin döngüsü 6,7 önemli ajan vardır. Doğru partikül ve çözünmüş bileşikler kaldırılır ve (örneğin, süngerler, Ascidians, polychaetesi, ve Bivalvlerden gibi) bentik süspansiyon besleyiciler tarafından atılır ölçme onların fizyolojisi, metabolizma ve beslenme ekoloji anlamak esastır. Birlikte hızı ölçümleri pompalama ile, aynı zamanda bu organizmalar ve su kalitesi yanı sıra ekosistem ölçekli süreçleri ekolojik etkisi aracılık ettiği besin akı bir miktarının sağlar.
kaldırma ve üretim partikül oranı ve çözünmüş com ölçme uygun yöntemi seçmeSüspansiyon filtre besleyiciler tarafından lira beslenme aktivitesini 8 ile ilgili güvenilir veriler elde etmek için çok önemlidir. Riisgård ve diğerleri, uygunsuz yöntemler önyargı sonuçları işaret ettiği gibi, deneysel koşullar deforme yenmesi ve bazı maddelerin atılımı yanlış tahminler üretmek ve bu organizmalar tarafından işlenen besin akı hatalı ölçümü yol açabilir.
iki en sık kullanılan yöntemler inkübasyon (dolaylı teknikler) ya da ortam eşzamanlı toplama ve üfledi su (doğrudan teknikleri) ya dahil filtre besleyiciler partikül ve çözünmüş besin akıları ölçmek için. İnkübasyon yöntemleri inkübe su içinde parçacık konsantrasyonu ve çözünmüş besin değişim oranını ölçmek ve yeterli kontrol 8 ile karşılaştırıldığında, üretim veya kaldırma hızları tahmin dayanmaktadır. Bununla birlikte, bir inkübasyon odası içinde bir organizma içine kendi Feedin değiştirebilirg nedeniyle ve / veya gıda konsantrasyonda nedeniyle ya da boşaltım kuluçka su 7,9 bileşiklerin (ve referanslar orada) birikimine oksijen bir düşüş nedeniyle doğal akış rejiminde değişiklikler davranışı pompalama. Kapatılma ve modifiye su etkilerine ek olarak, inkübasyon teknikleri büyük bir eğilim yeniden filtreleme etkileri (örnek 10 bakınız) kaynaklanmaktadır. Bu metodolojik sorunların bazıları inkübasyon kabına 11 sağ hacim ve şekil kullanarak veya yerinde 12 bir sirkülasyon çan kavanoz sisteminin getirilmesi ile üstesinden olmasına rağmen, bu tekniğin genellikle çıkarma ve üretim oranları göz ardı etmektedir. Bu çözünmüş organik azot (DON) ve karbon (DOC) ya da inorganik besin olarak çözünmüş bileşiklerin metabolizması miktarının, inkübasyon teknikleri 13 kaynaklanan önyargılar özellikle yatkın olduğu kanıtlanmıştır.
60'ların sonlarında ve 70'lerin başlarında Henry Reiswig içinde9,14,15 ayrı yerinde organizmalar tarafından inhale ve üfledi su örnekleme yoluyla, dev Karayip süngerler tarafından parçacık kaldırma ölçmek için doğrudan tekniklerin uygulanmasını öncülük etmiştir. Daha küçük süspansiyon besleyiciler ve daha zorlu sualtı koşullarda Reiswig tekniğini uygulamak için zorluk nedeniyle, bu alandaki araştırmaların toplu çoğunlukla dolaylı kuluçka teknikleri 16 kullanılarak (in vitro) laboratuvara sınırlandırılmıştır. Yahel ve arkadaşları küçük çaplı şartlarında çalışmak için in situ tekniği Reiswig doğrudan sığdırılmıştır. Bu yöntem, Inex 16 olarak adlandırılan, rahatsız organizmalar tarafından (Ex) (In) inhale ve ekshale su eşzamanlı sualtı örnekleme dayanmaktadır. Numunelerin bir çift (inex) arasında bir bir madde (örneğin, bakteri) farklı konsantrasyonlarda hayvan tarafından bu maddenin tutma (veya üretimi) bir ölçüsünü sağlar. INEX tekniği açık uçlu tüpler istihdam vepasif toplama tüpünde ortam su yerine çalışılan organizmanın pompalama faaliyeti tarafından üretilen excurrent jet dayanır. Yahel ve arkadaşları başarılı 15 farklı süspansiyon çalışmada bu tekniği uygulanmış olsa da takson besleyiciler (örneğin, 17), yöntem bazı excurrent menfezlerin ufacık büyüklüğüne göre gerekli uygulama ve deneyimi yüksek seviyede ile kısıtlı olup, tarafından deniz koşulları.
Bu engelleri aşmak için, biz dakika tüpleri ile örneklenmiş suyun kontrollü emme (dış çapı <1,6 mm) dayalı alternatif bir teknik geliştirdi. Amacımız bu tür bentik süspansiyon besleyiciler excurrent deliği gibi temiz ve çok özel bir noktada, in situ su örnekleme kontrol sağlayacak basit, güvenilir ve ucuz cihaz oluşturmak oldu. Etkili olabilmesi için, yöntem, ortam akış rejimini etkileyen veya b değiştirmek şekilde değil müdahaleci olmayan olmak zorundaçalışılan organizmaların ehavior. Burada yer alan cihaz, VacuSIP olarak adlandırılır. Bu Yahel ve arkadaşları tarafından geliştirilen SIP sisteminin bir basitleştirme olduğunu. Derin deniz ROV tabanlı noktası örnekleme (2007) 18. VacuSIP orijinal SIP çok daha ucuzdur ve SCUBA-bazlı çalışmalar için adapte edilmiştir. Sistem laboratuvar ortamlarında için Wright ve Stephens (1978) 19 ve Møhlenberg ve Riisgård (1978) 20 tarafından sunulan ve test edilmiş prensiplere göre dizayn edilmiştir.
VacuSIP sistemi bentik süspansiyon besleyiciler metabolizmasının in situ çalışmalar için tasarlanmış olsa da, aynı zamanda, laboratuar çalışmaları için kullanılabilir ve daha kontrollü ve temiz, nokta-kaynağı, su örneği yerde gereklidir. In situ filtrasyon veya uzun süreli (en az-saat) boyunca entegre gerekmektedir sistem özellikle yararlıdır. VacuSIP 2011 yılından bu yana YAHEL laboratuarda başarılı bir şekilde kullanılmıştır ve ayrıca sahiptirKarayipler ve Akdeniz sünger türlerinin 21 aracılı besin akı iki son yıllarda yapılan çalışmalarda istihdam edilmiştir (Morganti ve ark. sunulmuştur).
VacuSIP uygulandığı özel numune, uzun örnekleme süresi ve tarla koşullarında, kullanımı toplama filtre ve duyarlı analitler için numune depolamak için, standart protokoller Okyanusbilimsel bazı sapmalar gerektirir. VacuSIP sistemi veya toplama sonra bakteriyel aktivite ile alınan su numunelerinin modifikasyonu riski ile kontaminasyon riskini azaltmak için, biz yerinde filtrasyon ve depolama işlemlerinde çeşitli test edilmiştir. Farklı filtreleme cihazları, toplama gemiler ve depolama prosedürleri çözünmüş inorganik (PO 4 3-, NO x – NH 4 +, SiO 4) analizi için en uygun tekniği elde etmek için incelenmiş ve organik (DOC + DON) bileşikleri ve ultra plankton (<1081 m) ve partiküler organik (POC + PON) örnekleme. Diğer bir özellikle alan koşulları altında, kirlenme riskini azaltmak için, işleme adımlarının sayısı minimumda edildi. yöntem sunulduğu görsel biçim tekrarlanabilirliği kolaylaştırmak ve verimli tekniği uygulamak için gereken süreyi azaltmak için aydınlatmaktadır.
Sistem görünümü
2 mm kadar küçük exhalant deliklerle süspansiyon besleyiciler in situ pompalanan su içinde örnek için, her bir numunenin pompa etkinliği ilk aşağıdaki uçucu menfezi (ler) i ve excurrent açıklığı 16 akışını gözlemleyerek fluorescein boyalı deniz suyu, süzüldü salgılayarak görüntülenmiştir (18 şekil 2b de bakınız). Çalışma örneğinin (Cari Olmayan ve excurrent) tarafından inhale ve üfledi su, daha sonra eş zamanlı olarak özel olarak oluşturulmuş bir manipülatör yüklü dakika tüpler bir çift kullanımı ile ya da "ar ikisine örneklenirbaş aşağı esnek taşınabilir tripod ms "(Şekil 1 ve Ek Video 1). Çalışma organizma tarafından inhale su dikkatlice içinde veya çalışma organizmanın uçucu madde diyafram yakın bir tüpün proksimal ucunu yerleştirerek toplanır. Bir özdeş tüp daha sonra excurrent menfez içine yerleştirilir. Bu işlem tortu tabanda, örneğin kişi veya hayvanın bozukluğu, önlemek için iyi bir bakım gerektirir. örneklemeyi başlamak için, bir dalgıç bağlı bir şırınga iğnesi ile toplama kabında bir septumu delip örnekleme tüpü içinden kap içine alınan su numuneleri zorlamak için harici su basıncı sağlayan, her tüpün uzak ucu. emiş önce şişelere oluşturulan vakum ile ve dış su ve tahliye numune kabı arasındaki basınç farkı ile başlatılır .
üfledi su temiz bir koleksiyon sağlamak ve ambi yanlışlıkla emme önlemek içinent suyu 16, su örnekleme hızı excurrent akış oranı önemli ölçüde daha düşük bir hızda (<% 10) muhafaza edilmesi gerekmektedir. Emme hızı, borunun uzunluğu ve iç çapı (ID) ile kontrol edilir. küçük iç çapı da ihmal edilebilir bir ölü hacmi (<boru metre başına 200 ul) sağlar. uzun süreli (saat dakika) üzerinde örnekleme mümkün ilgi çoğu maddelerin doğal patchiness entegre etmek için yapar. Numuneler yeterince laboratuara taşınması yanı sıra uzun süreli sualtı örnekleme oturumları korunur sağlamak için yerinde filtrasyon bir hassas analitler için tavsiye edilir. Örnekleme gemiler, filtrasyon montaj ve boru seçimi çalışması organizmalar ve özel araştırma sorusu tarafından dikte edilir. Aşağıda açıklanan protokol tam metabolik profili (genel bir bakış için bakınız Şekil 2) ilgi olduğunu varsayar. Ancak, protokolün modüler yapısı f veriyorveya kolay değişiklik basit, hatta çok farklı örnekleme planları karşılamak için. Tam metabolik profil için örnekleme protokolü aşağıdaki adımları içermelidir: (1) Akış görselleştirme; (2) Örnekleme ultra plankton besleme (plankton <10 mikron); (3) (in-line filtreleri kullanarak) inorganik besin alımı ve atılımı Örnekleme; (4) Örnekleme organik alımı ve atılımı çözünmüş (in-line filtreleri kullanarak); (5) Partikül besleme ve atılımı (in-line filtreleri kullanarak); (6) 2. adımı tekrarlayın (kalite kontrol gibi ultra-plankton besleme); (7) görselleştirme akış.
Lojistik mümkün, metabolik profil ölçümleri hızı pompalama ile birlikte kullanılması tavsiye edilir (örn, boya ön hız yöntemi, 16) yanı sıra solunum ölçümleri. Bu ölçümler en iyi örnekleme oturumun başında ve sonunda alınır. solunum ölçümü için, sualtı optodes veya mikro-elektrotlar tercih edilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
hazırlık adımlar
DOM ve besin analizi için kolektör şişeler
Toplayıcı damarlar çözünmüş mikro bileşenleri ile etkileşime girebilir ve örnekleyici duvarları büyüme 30-34, DOM ve besin koleksiyonu için farklı şişeler test edildi bakteriler için bir substrat olabilir beri. Numuneler hızla 30 donmuş değilse cam şişe kadar iki kat silika ilk konsantrasyonunu artırabilir ç?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz saha içinde yaptığı yardım için Manel Bolivar teşekkür ederiz. Biz araştırma ve örnekleme izinleri verdikleri destekten dolayı "Parc Natural del Montgri les Illes Medler i el Baix Ter" minnettarız. sualtı manipülatör Ayelet Dadon-Pilosof tarafından tasarlanan ve Sn Pilosof tarafından imal edilmiştir. Bu eser İspanyol Hükümeti projesi CSI-Mercan [RC ve MR hibe numarası CGL2013-43106-R] tarafından ve TM "Ministerio de Educación, Kültür y Deporte (• MECD)" bir FPU burs ile desteklenmiştir. Bu G. Yahel için Katalan Hükümeti [hibe sayısı 2014SGR1029] ve ISF hibe 1280-1213 ve BSF hibe 2012089 tarafından finanse edilen bir Deniz Biyojeokimya katkısı ve Küresel Değişim Araştırma grubudur.
Materials
| GorillaPod, Original | Joby | GP000001 | flexible portable tripod |
| Flangeless Ferrule | IDEX Health & Science | P-200X | 1/16" in Blue/pk |
| Male Nut | IDEX Health & Science | P-205X | 1/16" in Green/10pk |
| Female to Female Luer | IDEX Health & Science | P-658 | |
| Female-Male Luer | IDEX Health & Science | P-655 | |
| Peek Tubing (250µm ID) | IDEX Health & Science | 1531 | 1/16" OD x 0.01in ID x 5ft lenght. Alternative ID can be used |
| Two component resin epoxy | IVEGOR | 9257 | Mix well the two component resin before use |
| (TOC) EPA VIALS | Cole -Parmer | 03756-20 | 40 ml glass vials. Manifactured also by Thomas Scientific (ref. number 9711F09) |
| HDPE VIALS | Wheaton | 986701 (E78620) | 20 ml high-density polyethylene vials |
| Vacuette Z no additive | Greiner bio-one | 455001 | pre-vacuum by the manufacturer |
| Septum Sample Bottles | Thomas Scientific | 1755C01 | 250 ml glass bottles |
| Septum Cap 1 | Wheaton | W240844SP (E7865R) | 22-400 for HDPE vials |
| Septum Cap 2 | Wheaton | W240846 (1078-5553) | 24-400 for glass vials and bottles. Also manufactured by Thermo Scientific National (ref. 03-377-42) |
| In-line stainless steel Swinney Filter holders | Pall | 516-9067 | 13mm of diameter |
| PTFE Seal Washer | Pall | 516-8064 | ring for stainless steel filter holders |
| TCLP Glass Filters | Pall | 516-9126 | binder-free glass fiber filters, 13mm of diameter, pore size 0.7µm |
| Polycarbonate Filter Holders | Cole -Parmer | 17295 | 13mm of diameter |
| Isopore Membrane Filters | Millipore | GTTP01300 | 13mm of diameter, pore size 0.2 µm |
| Contrad 2000 Solution | Decon Labs | E123FH | highly soluble basic mix of anionic and non-ionic surfactant solution |
| Sterile Syringe Filters | VWR International Eurolab S.L. | 514-0061P | 25mm of diameter , pore size 0.2 µm |
| Fluorescein | Sigma-Aldrich | (old ref.28802) 46955-100G | 100g |
| Holdex, disposable,sterile | Greiner bio-one | 450263 | sterile, single-use tube holder with off-center luer for Vacuette |
| Sterile Needles | IcoGammaPlus | 5160 | 0.7mm x 30mm |
| Cryovials Nalgene | Nalgene | V5007(Cat. No.5000-0020) | 2ml |
| Cryobox carton | Rubilabor | M-600 | 145x145x55mm p/microtube 1.5 ml |
| Orthophosphoric Acid | Sigma | 79617 | |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148 | 500g |
| Glutaraldehyde | Merck | 8,206,031,000 | 25%, 1 L |
| Hand Vacuum Pump | Bürkle | 5620-2181 |
Referenzen
- Gili, J. M., Coma, R. Benthic suspension feeders: their paramount role in littoral marine food webs. Trends. Ecol. Evol. 13 (8), 316-321 (1998).
- Reiswig, H. In situ pumping activities of tropical Demospongiae. Mar. Bio. 9, 38-50 (1971).
- McMurray, S., Pawlik, J., Finelli, C. Trait-mediated ecosystem impacts: how morphology and size affect pumping rates of the Caribbean giant barrel sponge. Aquat. Bio. 23 (1), 1-13 (2014).
- Pile, A. J., Young, C. M. The natural diet of a hexactinellid sponge: benthic-pelagic coupling in a deep-sea microbial food web. Deep-Sea Res. Pt. I. 53 (7), 1148-1156 (2006).
- Nielsen, T., Maar, M. Effects of a blue mussel Mytilus edulis bed on vertical distribution and composition of the pelagic food web. Mar. Ecol. Prog. Ser. 339, 185-198 (2007).
- De Goeij, J. M., et al. Surviving in a marine desert: the sponge loop retains resources within coral reefs. Science. 342, 108-110 (2013).
- Maldonado, M., Ribes, M., van Duyl, F. C. Nutrient Fluxes Through Sponges. Biology, Budgets, and Ecological Implications. Advances in Marine Biology. 62, (2012).
- Riisgård, H. U. On measurement of filtration rates in bivalves – the stony road to reliable data: review and interpretation. Mar. Ecol. Prog. Ser. 211, 275-291 (2001).
- Reiswig, H. M. Water transport, respiration and energetics of three tropical marine sponges. J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 14, 231-249 (1974).
- Jiménez, E., Ribes, M. Sponges as a source of dissolved inorganic nitrogen: nitrification mediated by temperate sponges. Limnol. Oceanogr. 52 (3), 948-958 (2007).
- Diaz, M. C., Ward, B. Sponge-mediated nitrification in tropical benthic communities. Mar. Ecol. Prog. Ser. 156, 97-107 (1997).
- Ribes, M., Coma, R., Gili, J. Natural diet and grazing rate of the temperate sponge Dysidea avara (Demospongiae, Dendroceratida) throughout an annual cycle. Mar. Ecol. Prog. Ser. 176, 179-190 (1999).
- Jiménez, E. . Nutrient fluxes in marine sponges: methodology, geographical variability and the role of associated microorganisms. , (2011).
- Reiswig, H. M. Particle feeding in natural populations of three marine demosponges. Biol. Bull. 141 (3), 568-591 (1971).
- Reiswig, H. M. In situ pumping activities of tropical Demospongiae. Mar. Biol. 9 (1), 38-50 (1971).
- Yahel, G., Marie, D., Genin, A. InEx – a direct in situ method to measure filtration rates, nutrition, and metabolism of active suspension feeders. Limnol. Oceanogr-meth. 3, 46-58 (2005).
- Genin, A., Monismith, S. S. G., Reidenbach, M. A., Yahel, G., Koseff, J. R. Intense benthic grazing of phytoplankton in a coral reef. Limnol. Oceanogr. 54 (2), 938-951 (2009).
- Yahel, G., Whitney, F., Reiswig, H. M., Leys, S. P. In situ feeding and metabolism of glass sponges (Hexactinellida , Porifera) studied in a deep temperate fjord with a remotely operated submersible. Limnol. Oceanogr. 52 (1), 428-440 (2007).
- Wright, S. H., Stephens, G. C. Removal of amino acid during a single passage of water across the gill of marine mussels. J. Exp. Zool. 205, 337-352 (1978).
- Møhlenberg, F., Riisgård, H. U. Efficiency of particle retention in 13 species of suspension feeding bivalves. Ophelia. 17 (2), 239-246 (1978).
- Mueller, B., et al. Natural diet of coral-excavating sponges consists mainly of dissolved organic carbon (DOC). PLoS ONE. 9 (2), e90152 (2014).
- Gasol, J. M., Moran, X. A. G. Effects of filtration on bacterial activity and picoplankton community structure as assessed by flow cytometry. Aquat. Microb. Ecol. 16 (3), 251-264 (1999).
- Koroleff, F. Determination of reactive silicate. New Baltic Manual, Cooperative Research Report Series A. 29, 87-90 (1972).
- Murphy, J., Riley, J. P. A. Modified single solution method for the determination of phosphate in in natural waters. Anal. Chim. Acta. 27, 31-36 (1962).
- Shin, M. B. Colorimetric method for determination of nitrite. Ind.Eng.Chem. 13 (1), 33-35 (1941).
- Wood, E. D., Armstrong, F. A. J., Richards, F. A. Determination of nitrate in sea water by cadmium-copper reduction to nitrite. J. Mar. Biol. Assoc. U. K. 47 (1), 23-31 (1967).
- Sharp, J. H., et al. A preliminary methods comparison for measurement of dissolved organic nitrogen in seawater. Mar. Chem. 78 (4), 171-184 (2002).
- Sharp, J. H. Marine dissolved organic carbon: Are the older values correct. Mar. Chem. 56 (3-4), 265-277 (1997).
- Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems. Can. J. Fish. Aquat. Sci. 56 (10), 1801-1808 (1999).
- Degobbis, D. On the storage of seawater samples for ammonia determination. Limnol. Oceanogr. 18 (1), 146-150 (1973).
- Tupas, L. M., Popp, B. N., Karl, D. M. Dissolved organic carbon in oligotrophic waters: experiments on sample preservation, storage and analysis. Mar. Chem. 45, 207-216 (1994).
- Yoro, S. C., Panagiotopoulos, C., Sempéré, R. Dissolved organic carbon contamination induced by filters and storage bottles. Water Res. 33 (8), 1956-1959 (1999).
- Zhang, J. Z., Fischer, C. J., Ortner, P. B. Laboratory glassware as a contaminant in silicate analysis of natural water samples. Water Res. 33 (12), 2879-2883 (1999).
- Yoshimura, T. Appropriate bottles for storing seawater samples for dissolved organic phosphorus (DOP) analysis: a step toward the development of DOP reference materials. Limnol. Oceanogr-meth. 11 (4), 239-246 (2013).
- Strickland, J. D. H., Parsons, T. R. . A practical handbook of seawater analysis. , (1968).
- Eaton, A. D., Grant, V. Freshwater sorption of ammonium by glass frits and filters: implications for analyses of brackish and freshwater. Limnol. Oceanogr. 24 (2), 397-399 (1979).
- Norrman, B. Filtration of water samples for DOC studies. Mar. Chem. 41 (1-3), 239-242 (1993).
- Carlson, C. A., Ducklow, H. W. Growth of bacterioplankton and consumption of dissolved organic carbon in the Sargasso Sea. Aquat. Microb. Ecol. 10 (1), 69-85 (1996).
- Grasshoff, K., Ehrhardt, M., Kremling, K. . Methods of Seawater Analysis. Second, Revised and Extended Edition. , (1999).
- Perea-Blázquez, A., Davy, S. K., Bell, J. J. Nutrient utilisation by shallow water temperate sponges in New Zealand. Hydrobiologia. 687 (1), 237-250 (2012).
- Perea-Blázquez, A., Davy, S. K., Bell, J. J. Estimates of particulate organic carbon flowing from the pelagic environment to the benthos through sponge assemblages. PLoS ONE. 7 (1), e29569 (2012).
- Pile, A. J., Patterson, M. R., Witman, J. D. In situ grazing on plankton <10 µm by the boreal sponge Mycale lingua. Mar. Ecol. Prog. Ser. 141, 95-102 (1996).
