Transplantation von Fettgewebe-Derived Stem Cell Blatt, Leckage nach teilweiser Colectomy in einem Rattenmodell zu reduzieren
Summary
Die Vorbereitung und die Transplantation von abgeleitet Fettgewebe Stammzellen (ASC) Blätter auf unzureichend genähten kolorektalen Anastomosen in einem Rattenmodell wird vorgestellt. Diese neuartige Anwendung zeigt, dass ASC Blätter kolorektalen Anastomose Leckage reduziert werden können.
Abstract
Anastomosen Leckage ist eine katastrophale Komplikation nach Kolorektale Chirurgie. Obwohl aktuelle Methoden zur Leckage Prävention unterschiedlicher klinischer Wirksamkeit haben, sind sie bis jetzt unvollkommene Lösungen. Stammzell-Therapie mit ASC Sheets könnte eine Lösung für dieses Problem bieten. ASC gelten als aussichtsreiche Kandidaten für die Förderung der Gewebe, die Heilung aufgrund ihrer trophischen und immunmodulatorische Eigenschaften. Hier bieten wir Methoden, um High-Density-ASC Blätter zu produzieren, die auf einem kolorektalen Anastomose in einem Rattenmodell der Leckage reduzieren verpflanzt werden. ASC gebildet Zelle Blätter in Thermo-responsive Kultur-Gerichte, die leicht abgestellt werden können. Am Tag der Transplantation erfolgte eine teilweise Colectomy mit einem 5-Naht kolorektalen Anastomose. Tiere wurden sofort mit 1 ASC Blatt pro Ratte transplantiert. ASC Blätter eingehalten spontan die Anastomose ohne Klebstoff, Naht oder irgendwelche Biomaterial. Tiergruppen wurden geopfert, 3 bis 7 Tagen nach der Operation. Im Vergleich zu transplantierten Tieren, lag die Inzidenz von Anastomosen Abszesse und Leckage in Kontrolltieren. In unserem Modell war die Transplantation von ASC Blätter nach kolorektalen Anastomose erfolgreich und mit einer geringeren Leckrate verbunden.
Introduction
Partielle Colectomy mit eine primäre Anastomose ist eine häufig durchgeführte Operation, die für viele Erkrankungen des Dickdarms wie Darmkrebs, Morbus Crohn und Divertikulitis1,2getan werden kann. Die am meisten gefürchtete Komplikation nach kolorektalen Anastomose Anastomosen Leckage3ist. Obwohl mehrere Risikofaktoren im Zusammenhang mit Anastomosen Lecks identifiziert wurden, sind Lösungen zur Vermeidung von Leckagen Unkown4,5.
Fettgewebe gewonnenen Stromazellen Zellen (ASC) werden entzündungshemmende und trophischen Eigenschaften6,7, wodurch diese vielversprechende Kandidaten für regenerative Therapien8Zellen zugeordnet. Die Wirksamkeit des ASC, die Heilung des Gewebes zu fördern wurde in verschiedenen Geweben wie z. B. des Herzmuskels, Haut und Speiseröhre9,10,11,12,13gezeigt. Allerdings gibt es einige Berichte über den Einsatz von ASC, intestinale Heilung zu fördern. Lokale Transplantation von ASC, experimentelle kolorektalen Anastomosen über ASC-beschichtete Biosutures oder serosal Injektionen von ASC zeigte sich entweder keine Besserung bei der Heilung14 nicht verhindern, dass Anastomosen Leckage trotz ein günstigeres Anastomosen 15zu heilen.
Lokale Transplantation des ASC in der Schwebe oder in Kombination mit Biomaterialien möglicherweise unzureichend Zelle Zurückbehaltungs- oder eine unzureichende Verteilung der transplantierten Zellen11zugeordnet. Zelle Blatt Technologie16,17 bietet eine innovative Methode der ASC Lieferung18,19. Daher wurde in einer früheren Studie, ein neuartiger Ansatz vorgeschlagen, in welche ASCs organisiert in einer Zelle auf experimentelle kolorektalen Anastomose20Blatt angewendet werden kann. Diese Studie zeigte, dass ASC Blatt Transplantation erfolgreich bei der Verringerung der kolorektalen Anastomose Leckage nach teilweiser Colectomy in einem Rattenmodell ist. Dieser Artikel berichtet ASC Blatt Vorbereitung und chirurgische Transplantation Technik.
Protocol
Representative Results
Discussion
Anastomosen Leckage ist die am meisten Schwerwiegendes unerwünschtes Ereignis nach Kolon-Resektion mit eine primäre Anastomose. Optimale Techniken zur Vermeidung von Anastomosen Störung und Leckage fehlen noch. Lokale Anwendung eines Arrays von Biomaterialien wurde mit unterschiedlichen Ergebnisse25,26,27durchgeführt. Zelltherapien soll Gewebereparatur von Gewebeersatz oder die Stimulation der lokalen Heilung durch Parakrine…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren sind dankbar, dass Prof. Dr. S.E.R Hovius, Dr. M.A.M. Mureau und alle Chirurgen der Abteilung für plastische Chirurgie für die Sammlung des subkutanen Fettgewebes. P. Sukho wird durch einen Zuschuss aus den Niederlanden Fellowship-Programm (NFP-12/435), während der Durchführung der Studie unterstützt. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens wird unterstützt durch Zuschüsse aus niederländischen Arthritis Foundation (LP11).
Materials
| LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | ASC isolation and culture |
| Collagenase type I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Isolation |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Isolation |
| Fetal bovine serum | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, ASC isolation and culture |
| 3% acetic acid with methylene blue | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Isolation |
| Gentamicin | Gibco, Life technologies | 15750-037 | ASC isolation and culture |
| Ampothericin B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | ASC isolation and culture |
| Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Isolation |
| Centrifuge | Hettichlab | Rotina380 | ASC isolation and culture |
| Phosphate buffer saline | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, ASC isolation and culture |
| Ascorbic acid-2-phosphate | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC isolation and culture |
| Human recombinant fibroblast growth factor 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, ASC isolation and culture |
| Trypsin EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | ASC culture |
| Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC freezing |
| Thermo-responsive culture dishes | Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC sheet preperation |
| Non-absorbable braided silk 4/0 | B Braun | 21151042 | surgery |
| Non-absorbable monofilament polyamide 8/0 | B Braun | G1118170 | surgery |
| Absorbable braided polyglycolic acid 5/0 | B Braun | C1048207 | surgery |
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